DNA absorboi UV-valoa aallonpituudella, jonka enimmäisabsorbanssi on lähellä 260 nm. Tämä absorptio johtuu DNA:n aromaattisten emästen pii-elektroneista. DsDNA:ssa tai jopa RNA:n alueilla, joilla esiintyy kaksisäikeistä rakennetta, emäkset ovat pinoutuneet toistensa suuntaisesti, ja emäsmolekyyliorbitaalien päällekkäisyys johtaa UV-valon absorption vähenemiseen. Tätä ilmiötä kutsutaan hypokromaattiseksi vaikutukseksi. Kun DNAse vapauttaa nukleotideja dsDNA:sta, emäkset eivät ole enää päällekkäin kuten dsDNA:ssa, joten orbitaalien päällekkäisyys minimoituu ja UV-absorbanssi kasvaa. Tämä absorbanssin lisääntyminen on DNAse-aktiivisuuden Kunitz-yksikön perustana. Yksi Kunitzin yksikkö määritellään entsyymimääräksi, joka lisätään 1 mg/ml lohen siittiö-DNA:han ja joka aiheuttaa 0,001 absorbanssin lisäyksen minuutissa aallonpituudella 260 nm, kun se vaikuttaa voimakkaasti polymeroituneeseen DNA:han 25 °C:ssa 0,1 M NaOAc-puskurissa (pH 5,0). Yksikön nimi on tunnustus venäläis-amerikkalaiselle biokemistille M. Kunitzille, joka ehdotti standarditestiä vuonna 1946.

Standardientsyymivalmiste olisi ajettava rinnakkain tuntemattoman entsyymivalmisteen kanssa, koska DNA-valmisteiden ja niiden polymerisaatioasteen standardointi liuoksessa ei ole mahdollista.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.