DNA absorbuje światło UV o długości fali o maksymalnej absorbancji w pobliżu 260 nm. Absorpcja ta jest spowodowana elektronami pi w aromatycznych zasadach DNA. W dsDNA, a nawet w regionach RNA, gdzie występuje struktura dwuniciowa, zasady są ułożone równolegle do siebie, a zachodzenie na siebie orbitali molekularnych zasad prowadzi do zmniejszenia absorpcji światła UV. Zjawisko to nazywane jest efektem hipochromowym. Kiedy DNAza uwalnia nukleotydy z dsDNA, zasady nie są już ułożone tak jak w dsDNA, więc nakładanie się orbitali jest zminimalizowane i absorbancja promieniowania UV wzrasta. Ten wzrost absorbancji leży u podstaw jednostki Kunitza aktywności DNAse. Jedna jednostka Kunitza jest zdefiniowana jako ilość enzymu dodana do 1 mg/ml DNA spermy łososia, która powoduje wzrost absorbancji o 0,001 na minutę przy długości fali 260 nm, gdy działa na wysoce spolimeryzowane DNA w temperaturze 25 °C w 0,1 M buforze NaOAc (pH 5,0). Nazwa jednostki rozpoznaje rosyjsko-amerykańskiego biochemika M. Kunitza, który zaproponował test standardowy w 1946 r.

Standardowy preparat enzymatyczny powinien być prowadzony równolegle z nieznanym, ponieważ standaryzacja preparatów DNA i ich stopnia polimeryzacji w roztworze nie jest możliwa.

.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.