DNA absorbuje UV světlo s vlnovou délkou maxima absorbance blízko 260 nm. Tato absorpce je způsobena elektrony pí v aromatických bázích DNA. V dsDNA, nebo dokonce v oblastech RNA, kde se vyskytuje dvouvláknová struktura, jsou báze poskládány paralelně vedle sebe a překrývání molekulárních orbitalů bází vede ke snížení absorbance UV světla. Tento jev se nazývá hypochromní efekt. Když DNAse uvolňuje nukleotidy z dsDNA, báze již nejsou poskládány tak, jako v dsDNA, takže překrytí orbitalů je minimalizováno a absorbance UV záření se zvyšuje. Toto zvýšení absorbance je základem Kunitzovy jednotky aktivity DNAse. Jedna Kunitzova jednotka je definována jako množství enzymu přidaného k 1 mg/ml DNA lososí spermie, které způsobí zvýšení absorbance o 0,001 za minutu při vlnové délce 260 nm při působení na vysoce polymerizovanou DNA při 25 °C v 0,1 M pufru NaOAc (pH 5,0). Název jednotky vyjadřuje uznání rusko-americkému biochemikovi M. Kunitzovi, který navrhl standardní test v roce 1946.

Standardní enzymový preparát by měl být prováděn paralelně s neznámým, protože standardizace preparátů DNA a stupně jejich polymerizace v roztoku není možná.

.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.