Förklaring av vad som händer
Detta förutsätter att du har läst förklaringen om vad som händer under tunnskiktskromatografi. Om du inte har gjort det, följ den allra första länken högst upp på sidan och kom tillbaka till den här punkten efteråt.
Den blå föreningen är uppenbarligen mer polär än den gula – den har kanske till och med förmågan att vätebinda. Du kan se detta eftersom den blå föreningen inte färdas genom kolonnen särskilt snabbt. Det betyder att den måste adsorbera starkare till kiselgelen eller aluminiumoxiden än den gula. Den mindre polära gula tillbringar mer av sin tid i lösningsmedlet och tvättas därför mycket snabbare genom kolonnen.
Processen att tvätta en förening genom en kolonn med hjälp av ett lösningsmedel kallas eluering. Lösningsmedlet kallas ibland för eluent.
Hur blir det om du vill samla in den blå föreningen också?
Det kommer att ta en evighet att tvätta igenom den blå föreningen i den takt som den färdas just nu! Det finns dock ingen anledning till varför du inte kan byta lösningsmedel under eluering.
Antag att du byter ut lösningsmedlet som du har använt mot ett mer polärt lösningsmedel när allt det gula har samlats upp. Det kommer att ha två effekter, som båda kommer att påskynda den blå föreningen genom kolonnen.
-
Det polära lösningsmedlet kommer att konkurrera med den blå föreningen om utrymmet på kiselgelen eller aluminiumoxiden. Allt utrymme som tillfälligt upptas av lösningsmedelsmolekyler på den stationära fasens yta är inte tillgängligt för de blå molekylerna att fästa vid och detta kommer att ha en tendens att hålla dem i rörelse i lösningsmedlet.
-
Det kommer att finnas en större attraktion mellan de polära lösningsmedelsmolekylerna och de polära blå molekylerna. Detta kommer att tendera att locka alla blå molekyler som fastnar i den stationära fasen tillbaka till lösningen.
Nettoeffekten är att med ett mer polärt lösningsmedel tillbringar den blå föreningen mer tid i lösningen och rör sig därför snabbare.
Så varför inte använda detta alternativa lösningsmedel i första hand? Svaret är att om båda föreningarna i blandningen rör sig snabbt genom kolonnen redan från början kommer du förmodligen inte att få en så bra separation.
Hur blir det om allt i din blandning är färglöst?
Om du skulle använda kolonnkromatografi för att rena produkten av en organisk beredning är det ganska troligt att den produkt du vill ha kommer att vara färglös även om en eller flera av föroreningarna är färgade. Låt oss anta det värsta fallet att allt är färglöst.
Hur vet du när det ämne du vill ha har nått botten av kolonnen?
Det finns inget snabbt och enkelt sätt att göra detta! Det du gör är att samla in det som kommer ut från kolonnens botten i en hel serie märkta rör. Hur stort varje prov är beror naturligtvis på hur stor kolonnen är – du kan samla in 1 cm3-prov eller 5 cm3-prov eller vad som är lämpligt.
Du kan sedan ta en droppe från varje lösning och göra ett tunnskiktskromatogram av den. Du skulle placera droppen på baslinjen tillsammans med en droppe från ett rent prov av den förening som du tillverkar. Genom att göra detta upprepade gånger kan du identifiera vilka av dina prover som samlas in i botten av kolonnen som innehåller den önskade produkten, och endast den önskade produkten.
När du vet detta kan du kombinera alla prover som innehåller din rena produkt och sedan ta bort lösningsmedlet. (Hur du skulle separera lösningsmedlet från produkten är inte direkt relevant för detta ämne och skulle variera beroende på deras exakta beskaffenhet – så jag tänker inte ens försöka göra en generalisering.)