Tapahtumien selittäminen
Tässä oletetaan, että olet lukenut selityksen siitä, mitä tapahtuu ohutkerroskromatografian aikana. Jos et ole, seuraa aivan ensimmäistä linkkiä sivun yläreunassa ja palaa tämän jälkeen tähän kohtaan.
Sininen yhdiste on selvästi polaarisempi kuin keltainen – sillä on ehkä jopa kyky vetysidoksiin. Tämän huomaa siitä, että sininen yhdiste ei kulje pylväässä kovin nopeasti. Se tarkoittaa, että sen täytyy adsorboitua voimakkaammin silikageeliin tai alumiinioksidiin kuin keltaisen yhdisteen. Vähemmän polaarinen keltainen viettää enemmän aikaa liuottimessa ja siksi se huuhtoutuu kolonnin läpi paljon nopeammin.
Prosessia, jossa yhdiste huuhtoutuu kolonnin läpi liuottimen avulla, kutsutaan eluutioksi. Liuotinta kutsutaan joskus eluentiksi.
Mitä jos haluat kerätä myös sinisen yhdisteen?
Sinisen yhdisteen peseminen kolonnin läpi kestää ikuisuuksia sillä nopeudella, jolla se kulkee tällä hetkellä! Ei kuitenkaan ole mitään syytä, miksi et voisi vaihtaa liuotinta eluution aikana.
Es oletetaan, että vaihdat käyttämäsi liuottimen polaarisempaan liuottimeen, kun kaikki keltainen on kerätty. Tällä on kaksi vaikutusta, jotka molemmat nopeuttavat sinisen yhdisteen kulkua kolonnin läpi.
-
Polaarinen liuotin kilpailee sinisen yhdisteen kanssa tilasta silikageelillä tai alumiinioksidilla. Kaikki tila, jonka liuotinmolekyylit ovat tilapäisesti vallanneet stationäärifaasin pinnalla, ei ole käytettävissä sinisten molekyylien tarttumiseen, ja tämä pyrkii pitämään ne liikkeessä liuottimessa.
-
Polaaristen liuotinmolekyylien ja polaaristen sinisten molekyylien välille syntyy suurempi vetovoima. Tällä on taipumus houkutella paikallaan olevaan faasiin tarttuneet siniset molekyylit takaisin liuokseen.
Nettovaikutus on se, että polaarisemmalla liuottimella sininen yhdiste viettää enemmän aikaa liuoksessa ja liikkuu näin ollen nopeammin.
Miksi ei siis alun perin käytetä tätä vaihtoehtoista liuotinta? Vastaus on, että jos seoksen molemmat yhdisteet kulkevat alusta alkaen nopeasti kolonnin läpi, et luultavasti saa niin hyvää erotusta aikaan.
Mitä jos kaikki seoksessasi on väritöntä?
Jos aiot käyttää kolonnikromatografiaa orgaanisen valmisteen tuotteen puhdistamiseen, on melko todennäköistä, että haluamasi tuote on väritön, vaikka yksi tai useampi epäpuhtaus olisi värillinen. Oletetaan pahimmassa tapauksessa, että kaikki on väritöntä.
Miten tiedät, milloin haluamasi aine on päässyt kolonnin pohjalle?
Ei ole mitään nopeaa ja helppoa tapaa tehdä tätä! Se, mitä teet, on kerätä kolonnin pohjasta tuleva aine koko sarjaan merkittyjä putkia. Se, kuinka suuri kukin näyte on, riippuu tietenkin siitä, kuinka suuri kolonni on – voit kerätä 1 cm3:n näytteitä tai 5 cm3:n näytteitä tai mitä tahansa sopivaa.
Voit sitten ottaa pisaran jokaisesta liuoksesta ja tehdä siitä ohutkerroskromatogrammin. Asetat pisaran perusviivalle rinnakkain valmistamasi yhdisteen puhtaasta näytteestä otetun pisaran kanssa. Tekemällä tämän toistuvasti voit tunnistaa, mitkä kolonnin pohjalle kerätyistä näytteistäsi sisältävät haluttua tuotetta ja vain haluttua tuotetta.
Kun tiedät tämän, voit yhdistää kaikki näytteet, jotka sisältävät puhdasta tuotetta, ja poistaa sitten liuottimen. (Se, miten erotat liuottimen tuotteesta, ei liity suoraan tähän aiheeseen ja vaihtelee niiden tarkan luonteen mukaan – joten en edes yritä yleistystä.)