Abstract
Objective. Selvittää Lactobacillus plantarum 299v -valmisteen vaikutus syljen kortisoli- ja IgA-pitoisuuksiin nuorilla aikuisilla tutkimusstressissä. Suunnittelu. Satunnaistettuun kaksoissokkoutettuun, lumekontrolloituun tutkimukseen otettiin mukaan 41 opiskelijaa, joilla oli edessä akateeminen tentti. Probioottibakteeria tai plasebotuotetta annettiin kapseleina kerran päivässä 14 päivän ajan. Sylki kerättiin ja koetun stressin testi täytettiin jokaisella näytteenottokerralla. Sylki kerättiin kortisolimääritystä varten sähkökemiallisella immunomäärityksellä (ECLI) ja syljen IgA analysoitiin entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA). Laktobasillien määrää arvioitiin viljelemällä sylkeä valikoivalla elatusaineella, ja L. plantarum 299v tunnistettiin satunnaisesti valituista pesäkkeistä polymorfisen DNA:n satunnaisvahvistuksella (RAPD). Tulokset. Hoitoryhmän ja plaseboryhmän välillä havaittiin merkittävä ero kortisolipitoisuuksissa () sekä merkittävä lisäys laktobasillien määrässä hoitoryhmässä verrattuna plaseboryhmään (). Syljen IgA:n osalta ei havaittu merkittäviä muutoksia. Päätelmät. Probioottibakteeri, jolla on kyky vähentää ärtyvän suolen oireyhtymän (IBS) oireita, kielsi stressimerkkiaineen kortisolin kohonneen tason tutkimusaikana. Tutkimuksen rekisteröintinumero on NCT02974894, ja tutkimus on rekisteröity ClinicalTrials.gov.
1. Johdanto
Ruuansulatuskanavan ja fysiologisen stressin välillä on yhteys, ja syljen kortisoli ja syljen immunoglobuliini A (syljen IgA) voidaan ottaa stressin merkkiaineiksi . Kortisoli on steroidihormoni, jota lisämunuaiset vapauttavat vastauksena stressiin, ja sen kohonneet tasot on yhdistetty immuunijärjestelmän tukahduttamiseen . Syljen IgA on osa suun immuunipuolustusta, ja se on syljen runsain vasta-aine, pääasiassa erittyvän IgA:n muodossa . Pienet sylkirauhaset, jotka sijaitsevat koko suun limakalvolla, erittävät noin 30-35 % kaikesta syljen IgA:sta, jota esiintyy aikuisen koko syljessä .
Probiootit määritellään ”eläviksi mikro-organismeiksi, jotka riittävinä määrinä annosteltuina tuottavat terveyshyötyä isännälle” . L. plantarum 299v on aiemmissa tutkimuksissa osoittanut myönteistä vaikutusta ärtyvän suolen oireyhtymän (IBS) oireisiin, kuten turvotukseen ja kipuun . Tämän kannan on myös osoitettu ehkäisevän suoliston vuotoa, mikä puolestaan voisi heikentää hypotalamus-aivolisäke-lisämunuais-lisämunuais-akselin (HPA-akselin) stressireaktiota. Aiempia tutkimuksia L. plantarum 299v:n vaikutuksesta stressiin liittyviin tiloihin ei ole tehty. On kuitenkin osoitettu, että Lactobacillus rhamnosus R0011:stä ja Lactobacillus helveticus R0052:sta koostuva probioottinen seos alensi merkittävästi eläinten veren kortikosteronipitoisuuksia eli kortisolianalogiaa . Myös rotat, jotka altistuivat akuutille ajallisesti rajoitetulle stressitekijälle, stressaantuivat vähemmän Lactobacillus farciminis -käsittelyn jälkeen , minkä lisäksi lipopolysakkaridien (LPS) pitoisuudet veressä pienenivät .
Probioottisten bakteerien vaikutuksista syljen stressimerkkiaineisiin ei tiedetä paljoa, vaikka sylkinäytteenotto on helppo ja ei-invasiivinen menetelmä, joka ei aiheuta koehenkilölle haittaa tai epämukavuutta. Tämä on erityisen tärkeää arvioitaessa stressimerkkiaineita, joiden akuutti nousu saattaa johtua näytteenottomenetelmästä eikä tutkimuksessa arvioidusta akuutista stressitekijästä. Mitä tulee probioottien vaikutuksiin syljen IgA-pitoisuuksiin, useimmat tutkimukset liittyvät erilaisten hengitystieinfektioiden esiintyvyyteen , ja aiemmassa tutkimuksessa raportoitiin, että ulosteen erittyvän IgA:n pitoisuudet kasvoivat lapsiryhmässä, joka sai L. rhamnosus HN001 -valmistetta, verrattuna lumelääkeryhmään . Samanlaisia tuloksia saatiin L. rhamnosus GG -kannalla .
Krooninen stressi on yhteydessä kohonneisiin kortisolitasoihin, mutta se, onko kortisoli fysiologisten stressireaktioiden aiheuttaja vai vain niiden seuraus, on avoin keskusteluille . Kortisolin vapautuminen on viivästynyt perifeerinen reaktio akuuttiin stressiin, ja on esitetty, että kortisoli vaikuttaa sekä stimuloivasti että suppressiivisesti elimistön stressireaktioon. Esimerkki stimuloivasta vaikutuksesta on kardiovaskulaarisen aktivaation käynnistyminen ; vastauksena esimerkiksi verenvuodon aiheuttamaan stressitekijään kortisoli kuitenkin tukahduttaa vähentyneen nestetilavuuden vastetta estämällä verisuonia supistavien stressihormonien nopeaa alkuvaiheen eritystä . Kortisolin immuunivastetta säätelevien ominaisuuksien osalta on esitetty, että sen eritys suojaa immuunivasteen ”ylilyönniltä”, joka muutoin tapahtuu stressin seurauksena . Vielä ei kuitenkaan ole selvää, mitä tarkoituksia kohonnut kortisolitaso palvelee elimistön reagoidessa stressiin .
Tässä tutkimuksessa päätavoitteena oli selvittää probioottibakteeri Lactobacillus plantarum 299v:n vaikutusta syljen kortisolitasoon nuorilla aikuisilla, jotka ovat tutkimusstressissä. Vaihtoehtoisina stressin merkkiaineina mitattiin syljen IgA:ta pienistä rauhasista ja koko ihmisen syljestä. Hypoteesina oli, että kortisolitasot alenisivat tai vakiintuisivat koeryhmässä verrattuna lumelääkeryhmään, jossa kortisolitasojen odotettiin nousevan tutkimusstressin aiheuttaman stressin vuoksi. Sen sijaan syljen IgA-tasojen odotettiin nousevan testiryhmässä verrattuna lumelääkeryhmään.
2. Materiaalit ja menetelmät
2.1. Aineisto ja menetelmät. Tutkimusasetelma
Tässä satunnaistetussa, plasebokontrolloidussa kaksoissokkotutkimuksessa oli vapaaehtoisia Lundin yliopiston opiskelijoita, iältään 18-30-vuotiaita, jotka osallistuivat tutkimukseen tenttiaikana. Poissulkukriteereinä olivat raskaus sekä antibioottien ja tilapäisen kortisonilääkityksen saanti tutkimusjakson aikana. Tutkimushenkilöiden määrästä päätettäessä tehtiin teholaskelma, ja 40 henkilöä katsottiin riittäväksi. Tutkimukseen ilmoittautui vapaaehtoisesti 42 tervettä nuorta aikuista, 28 naista ja 14 miestä, ja kaikki osallistujat antoivat allekirjoittamansa tietoon perustuvan suostumuksen tutkimukseen. Yhden miehen keskeyttämisen jälkeen 41 henkilöä suoritti koko koejakson loppuun. 21:lle annettiin testituotetta kapseleissa (L. plantarum 299v, perunatärkkelys, hydroksipropyylimetyyliselluloosa ja magnesiumstearaatti, (Probi AB, Lund, Ruotsi)), joiden päivittäinen annos oli 1 1010 pesäkkeitä muodostavaa yksikköä L. plantarum 299v:tä, ja 20:lle annettiin lumelääkekapseleita, jotka sisälsivät samoja aineksia kuin testituote bakteereita lukuun ottamatta. Ennen koejakson aloittamista osallistujia ohjeistettiin välttämään probioottituotteiden nauttimista kahden viikon pituisen huuhtelujakson aikana. Kapselin nauttiminen tapahtui tämän jälkeen kerran päivässä lounaan jälkeen, ja koehenkilöitä pyydettiin olemaan syömättä, juomatta, tupakoimatta tai nuuskaamatta tunnin ajan nauttimisen jälkeen. Osallistujia ohjeistettiin myös joko pureskelemaan kapselia, kunnes jauhe oli liuennut suuhun (vähintään 30 sekuntia), tai tyhjentämään kapseli lusikkaan ja pureskelemaan jauhetta 30 sekuntia ennen nauttimista. Kaikkien osallistujien vertailunäytteet kerättiin päivänä 0, ennen tuotteen nauttimista. Tutkimus jatkui 14 päivän ajan, ja aloituspäivä päätettiin yksilöllisesti kaikille osallistujille 1,5 viikon kuluessa.
2.2. Tutkimuksen tulokset Psykologinen arviointi
Tutkimukseen sisältyi psykologinen arviointi, jotta koehenkilöt voisivat arvioida itse kokemaansa stressiä. Käytettiin Levensteinin ym. kehittämää 30 kysymystä sisältävää kyselylomaketta, ja saatu alhaisempi pistemäärä osoittaa vähäisempää stressiä ja päinvastoin. Indeksi, joka antaa luvun 0:n ja 1:n välillä, laskettiin käyttämällä seuraavaa :
2.3. Sylkinäytteenotto
Sylki kerättiin alempien huulten limakalvoalueilta aiemmin kuvatulla tavalla ja koko sylki kerättiin samana näytteenottopäivänä. Jotta syljen erityksen vuorokausivaihtelujen vaikutusta syljen keräämisen aikana voitaisiin vähentää, kaikki näytteenotot tehtiin klo 15-17 välisenä aikana. Kaikki näytteet kerättiin päivänä 0 ja päivänä 14, ja päivinä 5 ja 10 otettiin vain kortisolinäytteet. Osallistujia ohjeistettiin olemaan syömättä, juomatta, nuuskaamatta, tupakoimatta, harjaamatta hampaitaan tai harrastamatta liikuntaa tuntia ennen näytteenottoa. Myös alkoholi oli kielletty kaksitoista tuntia ennen näytteenottoaikaa.
2.4. Kortisolianalyysi
Sylkinäytteenotto kortisolianalyysiä varten suoritettiin Salivette® for cortisol -laitteella (Sarstedt, Saksa) ja se tehtiin sen jälkeen, kun sylki oli kerätty IgA-analyysiä varten. Osallistujia ohjeistettiin kierrättämään suola suussa 2-5 minuutin ajan, kunnes se täyttyi syljellä, ja sylkemään se sitten varovasti takaisin putkeen. Putket laitettiin jäähän ja myöhemmin pakastettiin -20 °C:ssa analyysiin asti. Kortisolianalyysin suoritti Labmedicin Skåne (Skånen alueen yliopisto- ja aluelaboratoriot, Ruotsi), ja se tehtiin akkreditoinnin mukaisesti. Menetelmänä käytettiin yksivaiheista kilpailumääritystä, jossa detektointitekniikkana oli rutenium (Ru)-derivaattiin perustuva elektrokemiluminesenssi-immunomääritys (ECLI) .
2.5. Syljen IgA-määritys
Sylki kerättiin alahuulesta SialoPaper®-liuskalla (Oraflow Inc., New York, USA) ja asetettiin varovasti limakalvolle 60 sekunnin ajaksi, ja liuskan sisällä oleva syljen määrä mitattiin Periotron® 8000 -laitteella (Oraflow Inc., New York, USA). SialoPaper-liuska laitettiin 1 ml:aan PBS:ää (1,5 ml PP, Sarstedt, Saksa; Phosphate Buffered Saline, Dulbecco A, Oxoid, Englanti) jäähän ja säilytettiin -80 °C:ssa analyysiin asti. Stimuloimaton kokonainen sylki kerättiin pikkurauhassyljen näytteenoton jälkeen. Osallistujat istuivat hieman eteenpäin nojautuen ja antoivat syljen valua 2 ml:n mikroputkeen steriilin pillin avulla (1 ml:n steriilit kertakäyttöpipetit, Kemikalia, Ruotsi; 2 ml PP, Sarstedt, Saksa). Kaikki näytteet säilytettiin -80 °C:ssa analyysiin asti.
Sylkeen erittyvän IgA:n pitoisuus on suhteutettu kokonaisproteiinimäärään, ja siksi yksikkö % IgA/kokonaisproteiini on valittu edustamaan koko syljen analyysin tulosta. Tämä on merkityksellistä, koska IgA:n eritys muuttuu syljen virtausnopeuden mukaan, joka puolestaan muuttuu autonomiseen hermostoon kohdistuvien ärsykkeiden, esimerkiksi akuutin stressin, kroonisen stressin ja levon myötä. Tämä virtausnopeuden muutos otetaan huomioon mittaamalla IgA:n prosenttiosuus syljen kokonaisproteiinista, mikä tekee siitä tarkan menetelmän, kun verrataan eri koehenkilöiltä saatuja tietoja.
Syljen IgA-pitoisuuden analysoimiseksi tehtiin Krzywkowskin ym. mukaan modifioitu sandwich-ELISA, jossa käytettiin α1- ja α2-ketjuun spesifistä vuohen anti-inhimillistä IgA:ta (5 μg/mL, Sigma I0884; Sigma Chemical Co., 1998), St Louis, MO, USA), joka on konjugoitu alkaliseen fosfataasiin (Sigma A9669; laimennettu 1 : 30 000 PBST:hen). Kokonaisproteiinipitoisuus analysoitiin pikakäynnistysproteiinimäärityksellä (BIO-RAD) .
Syljen IgA pikkurauhasen syljessä ilmaistiin mg/100 ml. Syljen IgA:n analyysi suoritettiin Malmön yliopiston hammaslääketieteellisessä tiedekunnassa (Malmö, Ruotsi).
2.6. Laktobasillien levymäärä
Suun laktobasillien analysoimiseksi koehenkilöt pureskelivat parafiinipellettejä (Orion Diagnostics) syljen erityksen stimuloimiseksi, ja keräys suoritettiin samalla tavalla kuin syljen IgA:n keräys koko syljestä. Tämä sylkinäyte kerättiin kunkin näytteenottokerran lopussa, koska tämä näytteenottomenetelmä antaa voimakkaasti stimuloitua sylkeä, toisin kuin muut menetelmät. Putket asetettiin jäähän, ja 0,25 ml sylkinäytettä siirrettiin toiseen steriiliin mikroputkeen (1,5 ml PP, Sarstedt, Saksa), joka sisälsi 0,5 ml pakastusainetta. Molemmat putket säilytettiin -80 °C:ssa analyysiin asti.
Laktobasillien runsaus arvioitiin lautaslaskennan avulla. Näytteet laimennettiin ja levitettiin Rogosa-agarlevyille (Oxoid, Englanti) ja levyjä inkuboitiin 37 °C:ssa 72 tuntia anaerobisissa olosuhteissa (2,5 L, AnaeroGen™, Oxoid). Kustakin levystä poimittiin satunnaisesti kaksi pesäkettä ja viljeltiin uudelleen. Isolaatit pakastettiin ja säilytettiin pakastusmediassa -80 °C:ssa.
2.7. L. plantarum 299v
L. plantarum 299v:n tunnistaminen
Kunkin isolaatin DNA:n uuttamiseksi näytteet sulatettiin ja vorteksoitiin hieman ennen kuin niihin lisättiin 1 ml steriiliä MilliQ-vettä ja ne sentrifugoitiin suurimmalla nopeudella (14 800 g, 1 min). Supernatantti poistettiin ja lisättiin toinen 0,25 ml steriiliä MilliQ-vettä. Jäljelle jäänyt soluuute jauhettiin tasaisesti steriileillä Assistent®-lasihelmillä (Ø 2 mm, Glaswarenfabrik Karl Hecht, Saksa) ravistimessa (6 °C, 30 min), minkä jälkeen kaikkia näytteitä käytettiin RAPD-reaktiossa (Random Amplification of Polymorphic DNA) L. plantarum 299v:n esiintymisen tutkimiseksi. Valmistettiin 35 näytettä varten mastermix, joka sisälsi 175 μl puskuria (Qiagen, Saksa), 35 μl dNTP:tä (Roche Diagnostics, Saksa), 35 μl Primer 73:a (Qiagen, Saksa) ja 8,75 μl Taq-polymeraasia (Qiagen, Saksa). Kuhunkin PCR-putkeen (Gene Amp 0,5 ml, Applied Biosystems, Singapore) lisättiin 7,25 μL mastermixiä sekä 42,75 μL H2O:ta ja 1 μL näytteiden supernatanttia.
RAPD-reaktio suoritettiin PCR-laitteessa (Perkin Elmer, DNA Thermal Cycler, USA) Quednaun ym. mukaan. Geelit geelielektroforeesia varten valmistettiin lisäämällä 0,75 g agaroosia DNA Grade Electran® (VWR, Belgia) 50 ml:aan TB-puskuria; sen jälkeen liuosta kuumennettiin kiehuvaksi ja kaadettiin geeliastioihin jäähtymään. Lopuksi geelit asetettiin TB-puskuria sisältäviin geelialustoihin. Jokaiseen kuoppaan lisättiin 2-5 μl kutakin näytettä ja 3 μl latauspuskuria ennen elektroforeesia (100 V, 1 h). Gel Redx3:a (Biotium Inc., USA), 1 ml 99 ml:ssa dH2O:ta, käytettiin 20 minuutin ajan geelien värjäämiseen, ja valokuvat otettiin Quednau et al. .
2.8. mukaisesti. Tilastolliset laskelmat
Tiedot arvioitiin tilastollisesti käyttämällä Kruskal-Wallisin yksisuuntaista varianssianalyysiä (ANOVA) riveillä tai Mann-Whitneyn riveillä tehtyä summatestiä tarvittaessa. A -testiä käytettiin absoluuttisten IgA-pitoisuuksien sekä absoluuttisten kortisolitasojen parittaiseen vertailuun. Tilastotyökaluina käytettiin Sigma Plot (11.0 ja 12.0) ja Excel 2013. Lisäksi L. plantarum 299v:n esiintymistä koskeva esiintyvyystesti suoritettiin Fisher Exact -testillä käyttäen QuickStatia (2.6). Tiedot esitettiin mediaanina ja kvartiilien välisenä vaihteluvälinä sekä keskiarvona ja keskihajontana. Kortisolinäytteiden minimi- ja maksimiarvot poistettiin poikkeavien arvojen vaikutuksen poistamiseksi, koska tiedoissa oli havaittavissa selvä poikkeama. Tämä koski vain kortisolinäytteitä. Niiden osallistujien arvot, jotka eivät täyttäneet kaikkia tutkimusvaatimuksia, kontrolloitiin, eikä niissä havaittu poikkeamia. Heidän tuloksensa otettiin siksi mukaan.
2.9. Eettinen lupa
Tutkimus hyväksyttiin Lundin alueellisessa eettisessä arviointilautakunnassa (viite 2013/166), ja eettisiin näkökohtiin kuuluivat muun muassa käytetyn tuotteen hyödyt ja riskit sekä mahdollisuus jo olemassa oleviin henkilökohtaisiin suhteisiin vastuullisen tutkimushenkilöstön ja tutkimusta tekevien koehenkilöiden välillä.
3. Tulokset
3.1. Eettiset näkökohdat. Psykologisen arvioinnin arviointi
Psykologisessa arvioinnissa ei havaittu merkittävää eroa koetun stressin suhteen ryhmien välillä, eikä myöskään kunkin ryhmän sisällä ollut merkittävää eroa, kun verrattiin eri näytteenottopäiviä.
3.2. Kortisolitasot syljessä
Absoluuttiset kortisolitasot (nM) viitepäivänä (päivä 0) olivat lumelääkeryhmässä 9,18 (±2,50) ja testiryhmässä 9,47 (±2,96), eikä näiden kahden ryhmän välillä ollut merkittävää eroa (). Kun kortisolin mediaanitasojen suhteellista muutosta verrattiin vertailuarvoon päivänä 0 (lähtötaso), ryhmien välillä havaittiin merkittävä ero päivänä 10 (; kuva 1). Ryhmien sisällä ei havaittu merkitsevyyttä.
3.3. IgA-pitoisuudet syljessä
Pienoisrauhasen syljen absoluuttiset IgA-pitoisuudet (mg/100 ml) viitepäivänä (päivä 0) olivat 1,99 (±3,76) lumelääkeryhmässä ja 4,80 (±9,17) koeryhmässä, eikä näiden kahden ryhmän välillä ollut merkittävää eroa (). Absoluuttiset IgA-pitoisuudet (% IgA/kokonaisproteiini) koko syljessä viitepäivänä (päivä 0) olivat lumelääkeryhmässä 25,3 (±7,37) ja testiryhmässä 27,1 (±12,2), eikä näiden kahden ryhmän välillä ollut merkittävää eroa (). Toisin kuin muuttuviin kortisolitasoihin, syljen IgA-pitoisuuksien mediaaniin koko syljessä tai pikkurauhasten syljessä probioottien nauttiminen ei vaikuttanut; toisin sanoen probioottiryhmän ja plaseboryhmän välillä ei havaittu merkittävää eroa (kuvat 2 ja 3 vastaavasti.).
3.4. Laktobasillien elinkykyinen määrä ja L. plantarum 299v:n tunnistaminen
Päivänä 14 probiootteja nauttineiden koehenkilöiden syljessä havaittiin merkitsevä lisäys laktobasillien runsaudessa verrattuna lumevalmistetta saaneisiin (). Lisäys oli merkitsevä () myös probioottiryhmässä, kun verrattiin lähtötasoa ja viimeistä näytteenottopäivää (, kuva 4). L. plantarum 299v:ksi tunnistettujen isolaattien esiintyvyys lisääntyi merkitsevästi 14. päivänä henkilöillä, joilla oli havaittavissa olevia laktobasillipitoisuuksia, sekä lumelääkeryhmään että lähtötilanteeseen verrattuna ().
4. Pohdinta
Useimmilla osallistujilla oli koe ennen tutkimuksen päättymistä, mikä johti siihen, että lumelääkeryhmällä koetun stressin havaitun stressin näennäinen, mutta ei merkitsevä (), huippu oli päivänä 10. Tämä osuu yksiin lumelääkeryhmän syljen kortisolipitoisuuden huipun kanssa päivänä 10 (kuva 1). Sitä vastoin probioottiryhmässä ei havaittu huippua, mikä viittaa siihen, että probioottien nauttiminen vaikutti stressiin, joka näkyi kortisolin erityksenä lisämunuaisista. Päivänä 14 monet vapaaehtoisista olivat saaneet tenttinsä valmiiksi, joten kortisolin vähenemistä voitiin odottaa, sillä kortisoli reagoi suhteellisen nopeasti akuutteihin stressitekijöihin.
Akatemiallista stressiä, tässä tapauksessa tenttikauden muodossa, ei voida pitää kroonisena stressinä, sillä osallistujat näkevät stressaavan jakson päättyvän. Siksi ehdotetaan, että akateeminen stressi muistuttaa stressireaktion osalta enemmän akuuttia stressiä. Tämän tutkimuksen kortisolitasot olivat samaa luokkaa kuin mitä aiemmin on raportoitu akuutin stressin yhteydessä .
Krooninen stressi liittyy jatkuvasti lisääntyneeseen kortisolin eritykseen. Viime aikoina on kiistelty siitä, ovatko krooniseen stressiin liittyvien monien sairauksien ja oireiden syynä varsinaiset kohonneet kortisolitasot vai pikemminkin se, miten kohdekudokset reagoivat kohonneisiin tasoihin . Tiedetään, että veren glukoosipitoisuuden pitkäaikainen nousu voi johtaa lihasten tuhoutumiseen, rasvan kertymiseen ja uudelleen jakautumiseen sekä mahdollisesti diabetekseen. Näin ollen probioottien mahdollisena kohteena voisivat olla kroonisesti stressaantuneet henkilöt, joilla jatkuvasti koholla olevat kortisolitasot lisäävät riskiä sairastua krooniseen stressiin liittyviin sairauksiin .
Syljen IgA:n mitatuissa pitoisuuksissa on yleensä suuria yksilöllisiä eroja, mikä hämärtää yrityksiä nähdä eroja pienten yksilöryhmien välillä. Eri ryhmien mediaaniarvot vastaavat kuitenkin hyvin muiden raportoimia arvoja . Nämä tulokset koko syljen näytteistä osoittivat, että plasebo- ja testiryhmän väliset arvot eivät eronneet merkittävästi toisistaan ja että molempien ryhmien mediaaniarvot olivat samankaltaisia. Kun tarkastellaan suhteellista muutosta kussakin ryhmässä, mediaaniarvo oli hieman positiivinen probioottiryhmässä, kun taas plaseboryhmässä se oli hieman negatiivinen. Verrattaessa 25. ja 75. persentiiliin havaittiin suurimman osan havaituista syljen IgA-pitoisuuksista nousua lumelääkeryhmässä, minkä vuoksi johtopäätöksiä on vaikea tehdä (kuva 2). Kroonista stressiä aiheuttavat stressitekijät on yhdistetty syljen IgA-tasojen laskuun , kun taas akuutin stressin on osoitettu nostavan tasoja , mikä viittaa immuunivasteen aktivoitumiseen. Voidaan siis olettaa, että tässä tutkimuksessa stressitekijä on todennäköisemmin akuutti kuin krooninen.
Edellisissä tutkimuksissa on havaittu suuntaus, joka viittaa siihen, että probiootit voivat nostaa syljen IgA-tasoja stressin aikana . Tämän tutkimuksen koehenkilöt saivat kuitenkin probiootteja vain kahden viikon ajan, ja vaikka tässä ryhmässä laktobasillien määrä oli merkittävästi korkeampi, voi mahdollisesti olla, että tutkimusjakso oli liian lyhyt, jotta yksilötasolla voitaisiin havaita selkeitä muutoksia. Syljen IgA-tasojen suurten yksilöllisten erojen vuoksi olisi myös ollut toivottavaa, että kussakin ryhmässä olisi ollut enemmän osallistujia.
Syljen IgA-tasot pikkurauhasen syljessä on todettu korkeammiksi kuin mitä muut ovat raportoineet, mikä saattaa johtua yksilöllisistä eroista tai tämän työn tutkimusasetelmasta. Osallistujiin sovellettiin esimerkiksi tiettyä stressitasoa ja stressityyppiä, jota ei sovellettu Sonessonin ym. tekemässä tutkimuksessa. Pikkurauhasen syljen tiedot osoittivat, että mediaaniarvot olivat korkeammat testiryhmässä kuin lumelääkeryhmässä, mutta ryhmien välinen ero ei ollut merkitsevä. Nousu näyttää olevan suurempi probiootteja saaneessa ryhmässä kuin plaseboryhmässä, mutta mediaaniarvon suhteellinen muutos on suunnilleen sama näissä kahdessa ryhmässä. Virhepalkit viittaavat kuitenkin suuriin vaihteluihin probiootteja saaneen ryhmän sisällä, mikä saattaa selittää ristiriidan (kuva 3).
Lyhytaikaisen naturalistisen stressin, mukaan lukien akateeminen stressi, odotetaan olevan jossain akuutin ja kroonisen stressin välimaastossa stressimarkkereiden lisääntymisen tai vähenemisen suhteen. Koska stressitekijää on vaikea määritellä sovelletun stressin tyypin osalta ja koska kuhunkin osallistujaan kohdistunut yksilöllinen stressi on voinut olla erilainen, havaitut merkityksettömät erot ovat sopusoinnussa teorian kanssa siitä, miten IgA voi heijastaa stressiä. Olisi ehkä ollut helpompi havaita syljen IgA:n muutoksia, jos tutkimusjakso olisi ollut pidempi tai jos lisänäytteitä olisi kerätty yksi tai kaksi viikkoa tutkimuksen jälkeen, sillä IgA-tasojen on muissa tutkimuksissa havaittu laskevan myös jonkin aikaa koetun stressin jälkeen. Toinen selitys voi olla se, että vaikka osallistujia kehotettiin kirjaamaan ylös kaikki terveydentilassaan tapahtuneet muutokset (esim. vilustumistapaukset), tätä ei valvottu eikä sitä verrattu syljen IgA:ta koskevien tietojen poikkeamiin. Vilustuminen ja muut hengitystieinfektiot aiheuttaisivat todennäköisesti syljen IgA:n lisääntymisen, sillä IgA on osa immuunijärjestelmän ensimmäistä puolustuslinjaa taudinaiheuttajia vastaan.
Laktobasillien määrä lisääntyi merkittävästi probioottiryhmässä myös lumelääkeryhmään verrattuna, mikä osoittaa, että annetut bakteerit pystyivät selviytymään suuontelossa (kuva 4). Tätä tuki myös RAPD-typisoinnin tulos, joka osoitti L. plantarum 299v:n esiintymistä näytteissä, joissa laktobasillien pitoisuudet olivat yli toteamisrajan. Näin ollen näyttää siltä, että probioottisten bakteerien lisääntyneen esiintymisen ja syljen kortisolitasojen alenemisen välillä on yhteys.
5. Johtopäätökset
Kortisolin eritysvasteessa on merkittävä ero probiootteja tai lumelääkettä saaneiden koehenkilöiden välillä, mikä mahdollisesti liittyy stressiin. Lisäksi probioottiryhmän laktobasillien määrässä havaittiin merkitsevä nousu lumelääkeryhmään verrattuna. Sen sijaan syljen IgA:n osalta ei havaittu merkitsevyyttä.
Kilpailevat intressit
Irini Lazou Ahrén on Probi AB:n työntekijä. Tuotteen ja lumekapselit toimitti Probi AB. Muita kilpailevia etunäkökohtia ei ole ilmoitettava.
Tekijöiden panos
Kaksi ensimmäistä kirjoittajaa, Hannah Andersson ja Cecilia Tullberg, osallistuivat tasapuolisesti tähän artikkeliin, ja ensimmäinen kirjoittaja on jaettu.
Kiitokset
Tekijät kiittävät laboratorioapua saaneita Jie Xu:ta ja Marie Kala:a, Lundin yliopisto.