Vysvětlení toho, co se děje
Toto předpokládá, že jste si přečetli vysvětlení toho, co se děje při tenkovrstvé chromatografii. Pokud jste tak neučinili, postupujte podle úplně prvního odkazu v horní části stránky a poté se k tomuto bodu vraťte.
Modrá sloučenina je zřejmě polárnější než žlutá – možná má dokonce schopnost vodíkové vazby. Poznáte to podle toho, že modrá sloučenina neprojde sloupcem příliš rychle. To znamená, že se musí silněji adsorbovat na silikagel nebo oxid hlinitý než žlutá. Méně polární žlutá stráví více času v rozpouštědle, a proto se proplaví kolonou mnohem rychleji.
Proces proplachování sloučeniny kolonou pomocí rozpouštědla se nazývá eluce. Rozpouštědlo se někdy označuje jako eluent.
Co když chcete shromáždit i modrou sloučeninu?
Propláchnout modrou sloučeninu rychlostí, jakou právě cestuje, bude trvat celou věčnost! Neexistuje však žádný důvod, proč byste nemohli měnit rozpouštědlo během eluce.
Předpokládejme, že nahradíte rozpouštědlo, které jste používali, polárnějším rozpouštědlem, jakmile bude všechna žlutá látka zachycena. To bude mít dva účinky, které oba urychlí průchod modré sloučeniny kolonou.
-
Polární rozpouštědlo bude soutěžit o místo na silikagelu nebo oxidu hlinitém s modrou sloučeninou. Jakýkoli prostor dočasně obsazený molekulami rozpouštědla na povrchu stacionární fáze není k dispozici pro modré molekuly, aby se na něj mohly přilepit, a to bude mít tendenci udržet je v pohybu v rozpouštědle.
-
Dojde k většímu přitahování mezi polárními molekulami rozpouštědla a polárními molekulami modré sloučeniny. To bude mít tendenci přitahovat všechny modré molekuly ulpívající na stacionární fázi zpět do roztoku.
Celkovým efektem je, že s polárnějším rozpouštědlem stráví modrá sloučenina více času v roztoku, a tak se pohybuje rychleji.
Proč tedy nepoužít především toto alternativní rozpouštědlo? Odpověď zní, že pokud obě sloučeniny ve směsi procházejí kolonou rychle hned od začátku, pravděpodobně nedosáhnete tak dobré separace.
Co když je vše ve vaší směsi bezbarvé?
Pokud byste chtěli použít sloupcovou chromatografii k čištění produktu organického přípravku, je docela pravděpodobné, že produkt, který chcete, bude bezbarvý, i když je jedna nebo více nečistot barevných. Předpokládejme, že v nejhorším případě je vše bezbarvé.
Jak poznáte, kdy se požadovaná látka dostala na dno kolony?
Neexistuje žádný rychlý a snadný způsob, jak to udělat! To, co děláte, je, že sbíráte to, co vychází ze dna kolony, do celé řady označených zkumavek. Jak velké budou jednotlivé vzorky, bude samozřejmě záviset na tom, jak velká je kolona – můžete sbírat vzorky o objemu 1 cm3 nebo 5 cm3 nebo cokoli, co je vhodné.
Z každého roztoku pak můžete odebrat kapku a vytvořit z ní tenkovrstvý chromatogram. Kapku byste umístili na základní čáru vedle kapky z čistého vzorku sloučeniny, kterou vytváříte. Tímto opakovaným postupem můžete určit, který z vašich vzorků odebraných na dně kolony obsahuje požadovaný produkt a pouze požadovaný produkt.
Jakmile to budete vědět, můžete spojit všechny vzorky, které obsahují váš čistý produkt, a poté odstranit rozpouštědlo. (Způsob, jakým byste oddělili rozpouštědlo od produktu, není pro toto téma přímo relevantní a lišil by se v závislosti na jejich přesné povaze – takže se ani nebudu pokoušet o zobecnění)
.