Imunohistochemická barvení

Co je to imunohistochemie?

Imunohistochemie (IHC) je považována za pokročilou formu histopatologie. Imunohistochemie se obvykle nepoužívá zpočátku, ale přidává se, když rutinní/běžné histologické vyšetření nestačí k vytvoření diagnózy.

IHC používá primární protilátky ke značení proteinu, poté se použije sekundární protilátka, která se váže na primární. Při imunoperoxidázovém barvení se protilátka spojí s enzymem, peroxidázou, který katalyzuje reakci, při níž se protein specificky obarví na hnědo. IHC může také zahrnovat fluorescenčně značenou protilátku, takže při pohledu pod světelným mikroskopem bude z emitované fluorescence patrný určitý vzor.

Vzor IHC je považován za diagnostický, prokazující jaderné, membránové nebo cytoplazmatické vzory. IHC se často používá v situacích, kdy přítomnost nebo nepřítomnost určitých proteinů může tvořit základ diagnózy. Lze ji také použít k rozlišení dvou různých chorobných procesů, které se jinak patologovi mohou jevit jako podobné.

Jak se imunohistochemie provádí?

Nejběžnější postup přípravy imunohistochemických preparátů je následující:

1. Fixace tkáně (obecně se IHC barviva fixují formalínem)
2. Zalití tkáně (do parafínu)
3. Rozřezání tkání
4. Retrieval (provádí se za použití tepla nebo proteolytických enzymů)
5. Montáž a dehydratace
6. Čištění a pozorování preparátů.

Jaké jsou výhody a nevýhody imunohistochemie?

Mezi výhody IHC patří:

• Pro IHC je možné použít čerstvé nebo zmrazené vzorky tkání.
• IHC je dobře zavedená a snadno dostupná.
• Náklady na IHC jsou relativně nízké
• Má rychlou dobu zpracování.
• Protože se nepoužívají živá infekční agens, je riziko pro lidské zdraví minimální.

Nevýhody IHC jsou následující:

• Barvení IHC není celosvětově standardizováno.
• Přestože náklady na postup jsou relativně nízké, vybavení potřebné k provedení IHC je nákladné.
• Kvantifikace výsledků je obtížná.
• IHC podléhá lidské chybě. Nejdůležitější je dobře vyškolený personál.

Jaké jsou příklady imunohistochemických barvení?

K identifikaci různých nádorů a jiných novotvarů se používají stovky imunohistochemických barvení. Níže je uvedeno jen několik IHC barvení používaných v dermatologii.

.

IHC barvení	Použití/název obrázku
BCL2	Slouží k rozlišení bazocelulárních karcinomů a trichoepiteliomů
CD3	T-buněčný marker; silně pozitivní u mycosis fungoides
CD4	Marker pomocných T-buněk
CD8	Supresorový T-buněčný marker
CD20	B-buněčný marker
CD30	Může být použit při diagnostice Hodgkinova lymfomu a anaplastických lymfomů. Velké buňky: Golgiho aparát a barvení membrány
CD31	Pomáhá identifikovat endoteliální nádor
CD34	Rozlišuje různé endoteliální nádory a je pozitivní u dermatofibrosarkomu
CD56	Používá se při diagnostice non-Hodgkinových lymfomů, leukemií a malobuněčných karcinomů
CD117	Marker pro receptor KIT a pozitivní u různých nádorů včetně mastocytózy
CDKN2A (p16)	Tumor supresorový marker pozitivní u nádorů spojených s HPV, aktinické keratózy a spinocelulárního karcinomu
CK (různé)	Cytokeratiny lze použít k rozlišení benigních a maligních adnexálních nádorů
CK 20	Specifický pro karcinom z Merkelových buněk. Může pomoci identifikovat adenokarcinomy gastrointestinálního a reprodukčního systému a také epiteliální nádory gastrointestinálního traktu
Cytokeratin s vysokou molekulovou hmotností	Používá se k detekci duktálních karcinomů, dlaždicobuněčných karcinomů a dalších epiteliálních novotvarů
Desmin	Marker svaloviny
EMA	Používá se k identifikaci ekrinních novotvarů, Pagetovy choroby a sebaceózních karcinomů
Faktor 13	Může pomoci klinikům rozlišit mezi dermatofibrosarkomem a dermatofibromem
HHV8	Human herpesvirus 8
HMB 45	Slouží k detekci melanocytů, zejména u melanomu, ale negativní u desmoplastického melanomu
Melan-a	Může pomoci identifikovat buňky melanocytárního névu a melanomy
PDL1	Programovaný ligand smrti 1
S-100	Používá se k označení nádorů melanocytů, naevi i melanom
SMA	Hladkosvalový antigen
SOX-10	Jaderný marker melanocytárních nádorů
Treponema pallidum	Demonstruje organismy u sekundární syfilis

Immunohistochemická barvení

.