Jedním z nejdůležitějších postupů ve virologii je měření titru virů – koncentrace virů ve vzorku. Široce používaným postupem pro stanovení množství infekčního viru je plakový test. Tato technika byla poprvé vyvinuta k výpočtu titrů zásob bakteriofágů. Renato Dulbecco tento postup v roce 1952 upravil pro použití ve virologii zvířat a od té doby se používá pro spolehlivé stanovení titrů mnoha různých virů.
Pro provedení plakové zkoušky se připraví desetinásobné ředění zásoby viru a 0,1 ml alikvotů se naočkuje na monovrstvy citlivých buněk. Po inkubační době, aby se virus mohl navázat na buňky, se monovrstvy pokryjí živným médiem obsahujícím látku, obvykle agar, která způsobí tvorbu gelu. Při inkubaci destiček uvolní původní infikované buňky virové potomstvo. Šíření nových virů do sousedních buněk je omezeno gelem. V důsledku toho každá infekční částice vytváří kruhovou zónu infikovaných buněk, která se nazývá plak. Nakonec se plak zvětší natolik, že je viditelný pouhým okem. Ke zvýšení kontrastu mezi živými buňkami a plaky se často používají barviva, která barví živé buňky. Tímto způsobem lze testovat pouze viry, které způsobují viditelné poškození buněk. Příklad plaků vytvořených poliovirem na monovrstvě HeLa buněk je zobrazen vlevo. Na tomto obrázku byly buňky obarveny krystalovou violetí a plaky jsou dobře viditelné v místech, kde byly buňky zničeny virovou infekcí.
Titr zásobního viru lze vypočítat v jednotkách tvořících plaky (PFU) na mililitr. Pro stanovení titru viru se počítají plaky. Aby se minimalizovala chyba, počítají se pouze destičky obsahující 10 až 100 plaků v závislosti na velikosti použité destičky pro buněčné kultury. Podle statistických zásad se při počítání 100 plaků bude titr vzorku lišit o plus minus 10 %. Pro zvýšení přesnosti se každé ředění provádí ve dvou opakováních. V níže uvedeném příkladu je na destičce z ředění 10-6 17 destiček. Titr zásoby viru je tedy 1,7 x 108 PFU/ml.
Příště se budeme zabývat tím, jak lze plakovou zkoušku použít k přípravě klonálních zásob virů, což je krok, který je nezbytný pro studium virové genetiky.
Dulbecco, R., & Vogt, M. (1953). Some problems of animal virology as studied by the plaque technique [Některé problémy virologie zvířat studované plakovou technikou]. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 18, 273-279
.