Co je to imunohistochemické barvení (IHC)?

Imunologické barvení využívá protilátky k detekci antigenu v buňkách nebo tkáni. Hlavní výhodou imunobarvení v imunohistochemii (IHC) je možnost vidět požadovaný cíl ve vzorku tkáně při zachování prostorového kontextu a architektury tkáně.

Immunohistochemické barvení (IHC): Imunobarvení: stručná definice

Typy barvení

Imunobarvení lze provádět buď přímo, nebo nepřímo. Konjugace našich aplikačně ověřených protilátek s řadou fluoroforů umožňuje přímé značení. Chcete-li si prohlédnout naši nabídku přímých konjugátů, klikněte zde.

Často se stává, že na základě úrovně exprese antigenu a jeho dostupnosti přímý konjugát nestačí k vizualizaci cíle zájmu. V těchto případech se používá nepřímé značení pomocí sekundární protilátky. Preferovanou metodou v CST je použití vysoce citlivých, jednostupňových detekčních činidel na bázi polymerů specifických pro králičí nebo myší IgG.

Příklady barvení IHC

Několik příkladů barvení IHC prováděných v CST je uvedeno níže. Každá z níže použitých protilátek prošla naším přísným validačním procesem, aby bylo možné s jistotou posoudit specifickou detekci požadovaného antigenu.

Jak se provádí imunohistochemické barvení (IHC)

Příprava tkáně

Postupy odběru, konzervace a fixace tkáně se liší v závislosti na vzorku nebo cíli zájmu. Odběr a fixace tkáně přímo ovlivňuje integritu vzorku a vaše experimentální výsledky.

K přípravě vzorků pro IHC se často používají fixační činidla s příčnou vazbou, jako je formalín, protože zachovávají strukturální integritu tkáně, což pomáhá zachovat její architekturu. Další možností je kryokonzervace (zmrazení) vzorků, což může být lepší volba, pokud se snažíte detekovat fosforylovaný cíl.

Vyhledání antigenu (epitopu)

Fixativa používaná k zachování strukturální integrity vzorku tkáně mají také nevýhody v tom, že mohou pohřbít epitop, který má vaše protilátka rozpoznat.

Existuje několik metod pro odhalení epitopů, které byly fixací zamaskovány. Patří mezi ně proteolytické vyhledávání antigenů, které se opírá o enzym, jako je proteináza K, nebo tepelně indukované vyhledávání epitopů (HIER), které využívá teplo k rozbití zesíťovaných vazeb a rozvolnění proteinů. Obě metody mohou odmaskovat epitopy, čímž je zpřístupní primární protilátce a umožní jejich barvení pomocí IHC.

Naší nejběžnější metodou získávání antigenů v CST je HIER. Naši vědci však testují více metod získávání antigenu, aby určili optimální podmínky pro použití každé protilátky v IHC. Doporučený protokol společnosti CST naleznete na datovém listu každé protilátky validované pro IHC.

Vazba protilátky

Výběr správné protilátky je jedním z nejdůležitějších kroků k získání úspěšného výsledku IHC. Všechny protilátky validované pro IHC od společnosti CST jsou ověřeny nejen jako protilátky se silným signálem ve tkáni, ale procházejí přísným validačním postupem, který potvrzuje specifičnost signálu. Naši vědci, kteří se specializují na IHC, testují velké množství protilátek a doporučují pouze ty, které jsou pro danou aplikaci nejvhodnější.

Klikněte sem a prohlédněte si protilátky validované IHC pro váš cíl.

Detekční systémy

Munohistochemické barvení (IHC) umožňuje 2 široké třídy detekce: 1) chromogenní a 2) fluorescenční. Pro chromogenní detekci doporučuje společnost CST používat systémy na bázi polymerů, které zabraňují omezením systému na bázi biotinu a zároveň zvyšují citlivost testu.

Vyzkoušejte SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, králík) #8114 nebo SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, myš) #8125 v závislosti na hostitelském druhu vaší primární protilátky.

Protibarvení

Po detekci protilátek mnozí výzkumníci dávají přednost protibarvení tkáně pro vizualizaci buněčné anatomie a orientaci pozorovatele s ohledem na konkrétní barvení. V CST provádíme protibarvení vzorků pomocí hematoxylinu č. 14166, který zbarví jádro modře. Při výběru protibarviva je důležité, aby bylo kompatibilní s vaším chromogenem. Pokud je například barva protilátky příliš podobná barvě chromogenu, signál protilátky bude obtížně rozpoznatelný.

Protokol barvení imunohistochemie (IHC)

Níže je uveden přehled našeho doporučeného protokolu a zvýrazněny jsou klíčové kroky k úspěšnému experimentu. Cílem společnosti CST je pomoci vám zlepšit vaši analýzu IHC poskytnutím validovaných protilátek a činidel, které vám umožní postupovat podle jednoduchého protokolu specifického pro daný produkt a dosáhnout reprodukovatelných výsledků s minimální nutností optimalizace.

Podívejte se na video s protokolem IHC nebo navštivte naši stránku s výběrem protokolu.

.