Was ist eine immunhistochemische Färbung?

Bei der Immunfärbung werden Antikörper zum Nachweis eines Antigens in Zellen oder Gewebe verwendet. Der Hauptvorteil der Immunfärbung in der Immunhistochemie (IHC) ist die Möglichkeit, das gewünschte Ziel in einer Gewebeprobe zu sehen und gleichzeitig den räumlichen Kontext und die Gewebestruktur zu erhalten.

Immunhistochemie (IHC) Färbung: Kurzdefinition

Färbungsarten

Immunfärbung kann entweder direkt oder indirekt durchgeführt werden. Die Konjugation unserer anwendungsgeprüften Antikörper mit einer Reihe von Fluorophoren ermöglicht eine direkte Färbung. Um unser Angebot an direkten Konjugaten zu durchsuchen, klicken Sie hier.

Aufgrund der Antigenexpression und der Zugänglichkeit reicht ein direktes Konjugat oft nicht aus, um das Ziel von Interesse sichtbar zu machen. In diesen Fällen wird eine indirekte Markierung mit einem sekundären Antikörper verwendet. Die bevorzugte Methode bei CST ist die Verwendung hochempfindlicher, einstufiger, polymerbasierter Nachweisreagenzien, die spezifisch für Kaninchen- oder Maus-IgG sind.

Beispiele für IHC-Färbungen

Nachfolgend sind einige Beispiele für IHC-Färbungen bei CST aufgeführt. Jeder der nachstehend verwendeten Antikörper hat unseren strengen Validierungsprozess durchlaufen, um den spezifischen Nachweis des gewünschten Antigens sicher zu beurteilen.

Wie wird eine immunhistochemische Färbung (IHC) durchgeführt?

Gewebevorbereitung

Die Verfahren zur Entnahme, Konservierung und Fixierung von Gewebe variieren je nach Probe oder gewünschtem Ziel. Die Entnahme und Fixierung des Gewebes wirkt sich direkt auf die Unversehrtheit der Probe und die Versuchsergebnisse aus.

Vernetzende Fixierungsmittel wie Formalin werden häufig zur Vorbereitung von Proben für die IHC verwendet, da sie die strukturelle Unversehrtheit des Gewebes bewahren, was zur Erhaltung der Gewebestruktur beiträgt. Eine andere Möglichkeit ist die Kryokonservierung (Einfrieren) der Proben, was sich als bessere Option erweisen kann, wenn Sie versuchen, ein phosphoryliertes Ziel nachzuweisen.

Antigen (Epitop) Retrieval

Fixiermittel, die zur Erhaltung der strukturellen Integrität der Gewebeprobe verwendet werden, haben auch den Nachteil, dass sie das Epitop, das Ihr Antikörper erkennen soll, verdecken können.

Es gibt verschiedene Methoden zur Aufdeckung von Epitopen, die durch die Fixierung maskiert wurden. Dazu gehören das proteolytisch-induzierte Antigen-Retrieval, bei dem ein Enzym wie Proteinase K zum Einsatz kommt, oder das hitzeinduzierte Epitop-Retrieval (HIER), bei dem Hitze eingesetzt wird, um vernetzte Bindungen aufzubrechen und Proteine zu entflechten. Beide Methoden können Epitope demaskieren, so dass sie für den primären Antikörper zugänglich werden und sich für die Färbung durch IHC eignen.

Bei CST ist unsere häufigste Antigen-Retrieval-Methode HIER. Unsere Wissenschaftler testen jedoch mehrere Methoden der Antigenrückgewinnung, um die optimalen Bedingungen für die Verwendung der einzelnen Antikörper in der IHC zu ermitteln. Das von CST empfohlene Protokoll finden Sie auf dem Datenblatt eines jeden IHC-validierten Antikörpers.

Antikörperbindung

Die Auswahl des richtigen Antikörpers ist einer der wichtigsten Schritte, um ein erfolgreiches IHC-Ergebnis zu erhalten. Alle IHC-validierten Antikörper von CST werden nicht nur daraufhin überprüft, ob sie ein starkes Signal im Gewebe aufweisen, sondern durchlaufen auch ein strenges Validierungsverfahren, um die Spezifität des Signals zu bestätigen. Unsere auf IHC spezialisierten Wissenschaftler testen eine große Anzahl von Antikörpern und empfehlen nur diejenigen, die für die jeweilige Anwendung am besten geeignet sind.

Klicken Sie hier, um nach IHC-validierten Antikörpern für Ihr Ziel zu suchen.

Detektionssysteme

Immunhistochemische Färbung (IHC) ermöglicht 2 breite Klassen von Nachweisen: 1) chromogener und 2) fluoreszierender Nachweis. Für den chromogenen Nachweis empfiehlt CST die Verwendung von Systemen auf Polymerbasis, die die Einschränkungen des biotinbasierten Systems vermeiden und gleichzeitig die Empfindlichkeit des Assays erhöhen.

Versuchen Sie SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Kaninchen) #8114 oder SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Maus) #8125, je nach Wirtsspezies Ihres primären Antikörpers.

Gegenfärbung

Nach der Antikörperdetektion bevorzugen viele Forscher eine Gegenfärbung des Gewebes, um die zelluläre Anatomie sichtbar zu machen und den Betrachter in Bezug auf die spezifische Färbung zu orientieren. Bei CST färben wir unsere Proben mit Hämatoxylin #14166 gegen, das den Zellkern blau färbt. Bei der Auswahl einer Gegenfärbung ist es wichtig, dass diese mit dem Chromogen kompatibel ist. Ist die Farbe der Gegenfärbung beispielsweise der Farbe des Chromogens zu ähnlich, ist das Antikörpersignal nur schwer zu erkennen.

Immunhistochemie (IHC) Färbeprotokoll

Nachfolgend finden Sie einen Überblick über unser empfohlenes Protokoll und die wichtigsten Schritte für ein erfolgreiches Experiment. CST möchte Ihnen helfen, Ihre IHC-Analyse zu verbessern, indem wir Ihnen validierte Antikörper und Reagenzien zur Verfügung stellen, die es Ihnen ermöglichen, ein einfaches, produktspezifisches Protokoll zu befolgen und reproduzierbare Ergebnisse mit minimalem Optimierungsaufwand zu erzielen.

Schauen Sie sich das IHC-Protokollvideo an oder besuchen Sie unsere Protokollauswahlseite.