Wat is immunohistochemie (IHC) kleuring?

Immunokleuring maakt gebruik van antilichamen om een antigeen in cellen of weefsel te detecteren. Het grote voordeel van immunokleuring in de immunohistochemie (IHC) is de mogelijkheid om het gewenste doelwit in een weefselmonster te zien met behoud van de ruimtelijke context en weefselarchitectuur.

Immunohistochemie (IHC) Kleuring: Short Definition

Types of Staining

Immunostaining kan zowel direct als indirect worden uitgevoerd. Conjugatie van onze voor toepassingen gevalideerde antilichamen aan een aantal fluoroforen maakt directe kleuring mogelijk. Om ons aanbod van directe conjugaten te bekijken, klik hier.

Vaak, gebaseerd op antigeenexpressieniveaus en toegankelijkheid, is een direct conjugaat niet voldoende om het doelwit van interesse te visualiseren. In deze gevallen wordt gebruik gemaakt van indirecte labeling met behulp van een secundair antilichaam. De voorkeursmethode bij CST is het gebruik van zeer gevoelige, één-staps, op polymeer gebaseerde detectiereagentia die specifiek zijn voor konijn of muis-IgG.

How Is immunohistochemistry (IHC) Staining Done?

Tissue Preparation

De procedures voor het verzamelen, preserveren en fixeren van weefsel variëren, afhankelijk van het monster of het te onderzoeken doel. Het verzamelen en fixeren van het weefsel heeft een directe invloed op de integriteit van het monster en op uw experimentele resultaten.

Fixeermiddelen met kruisbinding, zoals formaline, worden vaak gebruikt om monsters voor te bereiden voor IHC, omdat ze de structurele integriteit van het weefsel behouden, wat helpt de weefselarchitectuur te behouden. Een andere optie is om uw monsters te cryopreserveren (invriezen), wat een betere optie kan zijn als u probeert een gefosforyleerd doelwit te detecteren.

Antigen (Epitope) Retrieval

Fixatieven die worden gebruikt om de structurele integriteit van het weefselmonster te behouden, hebben ook nadelen in die zin dat ze de epitoop kunnen begraven waarvoor uw antilichaam is ontworpen om te herkennen.

Er bestaan verschillende methoden om epitopen te onthullen die zijn gemaskeerd door fixatie. Deze omvatten proteolytisch-geïnduceerde antigeen retrieval, waarbij een enzym zoals proteinase K wordt gebruikt, of warmte-geïnduceerde epitoop retrieval (HIER), waarbij warmte wordt gebruikt om verknoopte bindingen te verbreken en eiwitten af te wikkelen. Beide methoden kunnen epitopen ontmaskeren, waardoor ze toegankelijk worden voor het primaire antilichaam en geschikt worden voor kleuring door IHC.

Bij CST is HIER onze meest gebruikte antigen retrieval-methode. Onze wetenschappers testen echter meerdere methoden van antigeen retrieval om de optimale condities te bepalen voor het gebruik van elk antilichaam in IHC. Het aanbevolen protocol van CST is te vinden op het datasheet van elk IHC-gevalideerd antilichaam.

Antilichaam Binding

De selectie van het juiste antilichaam is een van de meest kritische stappen bij het verkrijgen van een succesvol IHC-resultaat. Alle IHC-gevalideerde antilichamen van CST zijn niet alleen geverifieerd op een sterk signaal in weefsel, maar ondergaan ook een strenge validatieprocedure om de specificiteit van het signaal te bevestigen. Onze wetenschappers, gespecialiseerd in IHC, testen een groot aantal antilichamen en bevelen alleen die aan die het meest geschikt zijn voor de toepassing.

Klik hier om door de IHC-gevalideerde antilichamen voor uw doelwit te bladeren.

Detectiesystemen

Immunohistochemie (IHC) kleuring maakt 2 brede klassen van detectie mogelijk: 1) chromogene en 2) fluorescerende. Voor chromogene detectie beveelt CST het gebruik aan van op polymeer gebaseerde systemen die de beperkingen van het op biotine gebaseerde systeem vermijden en tevens de gevoeligheid van de assay verhogen.

Probeer SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, konijn) #8114 of SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, muis) #8125, afhankelijk van de gastheersoort van uw primaire antilichaam.