Chemische structuur van HEPES = N-(2-hydroxyethyl)
piperazine-N’-
(2-ethaansulfonzuur)
piperazine-N’-
(2-ethaansulfonzuur)
HEPES is een veelgebruikte bufferende chemische stof, vergelijkbaar met Tris in Tris-HCl-buffers en fosfaten in PBS. Buffers worden gebruikt om de pH op een bepaalde waarde te houden en kunnen de toevoeging van kleine hoeveelheden zuren/basen “bufferen”.
Eigenschap van HEPES
Stabiele pH t.o.v. temperatuur, geen primaire aminogroepen, geen metaalchelatie, nabij fysiologisch pH-bereik. HEPES wordt vaak gebruikt om de oplosbaarheid van proteïnen in biochemische experimenten te handhaven.
- pKa bij 25C van 7,55 (7,31 bij 37C); (2e pKa bij pH 3 is niet van belang)
- bruikbaar bufferingsbereik van 6.8 tot 8,2
- moleculair gewicht 238,3 g/mol
- ΔpKa/ΔT = -.014
- HEPES bevat tertiaire aminen, die onder bepaalde omstandigheden reactief zijn.
- Chemische formule: C8H18N2O4S; N-(2-hydroxyethyl)-piperazine-N’-(2-ethaansulfonzuur); alias 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethaansulfonzuur; CAS-nummer: 7365-45-9
Buffers zijn typisch 1 M, bereid door HEPES te neutraliseren met natriumhydroxide. HEPES is in wezen onoplosbaar totdat het geneutraliseerd is.
1M HEPES KOH buffer 7.5
- 700 ml ultrapuur water
- 238.3 g HEPES
- KOH (kaliumhydroxide)-korrels om de pH aan te passen aan 7,5
- tot 1L w ultrapuur water; steriliseren door filtratie
1M HEPES-NaOH pH 7.5
- 700 ml ultrapuur water
- 238,3 g HEPES
- ~5,5 g NaOH (natriumhydroxide) pellets om de pH aan te passen aan 7,5
- tot 1L w ultrapuur water; steriliseer door filtratie
Links
- originele publicaties: Good’66 PMID 5942950, Good’74 PMID 4206745, Blanchard’84 PMID 6717292
- Wikipedia: bufferoplossing
- CP: gewone buffers
- Lijst van gewone buffers van Smith College