Abstract
Existența celulelor stem în lichidul amniotic uman a fost raportată pentru prima dată în urmă cu aproape zece ani. De la această descoperire, cunoștințele despre aceste celule au crescut dramatic. Astăzi, celulele stem din lichidul amniotic (AFS) sunt acceptate pe scară largă ca un nou instrument puternic pentru cercetarea fundamentală, precum și pentru stabilirea unor noi concepte terapeutice bazate pe celule stem. Este posibil să se genereze linii de celule AFS monoclonale stabile din punct de vedere genomic, cu un potențial proliferativ ridicat, fără a ridica probleme etice. Numeroase grupuri diferite au demonstrat că celulele AFS pot fi diferențiate în toate cele trei linii ale stratului germinativ, ceea ce este relevant atât pentru utilizarea științifică, cât și pentru cea terapeutică a acestor celule. De o importanță deosebită pentru aceasta din urmă este faptul că celulele AFS sunt mai puțin tumorigene decât alte tipuri de celule stem pluripotente. În această lucrare, am sintetizat cunoștințele actuale despre acest domeniu științific relativ tânăr. În plus, discutăm perspectivele viitoare relevante ale acestui domeniu promițător de cercetare a celulelor stem, concentrându-ne pe următoarele întrebări importante, la care trebuie să se răspundă.
1. Introducere
Deși celulele din lichidul amniotic uman sunt utilizate pe scară largă în diagnosticul prenatal de rutină, cunoștințele despre aceste celule rămân limitate. Cu toate acestea, noțiunea că în lichidul amniotic sunt prezente celule nediferențiate și diferențiate de diferite origini și linii genetice a fost susținută de mai multe rapoarte din ultimele trei decenii. Acest lucru nu este surprinzător, având în vedere că în lichidul amniotic au fost detectate celule aparținând epiteliului amniotic, pielii fetale și sistemelor urogenital, respirator și gastrointestinal fetale. În timpul gestației prelungite, în lichidul amniotic pot fi găsite secreții fetale respiratorii, urinare și intestinale. În plus, se știe, de asemenea, că compoziția, morfologia și proprietățile de creștere ale probelor de celule din lichidul amniotic sunt afectate de anumite patologii fetale, cum ar fi, de exemplu, defecte ale tubului neural sau gastroschisis .
Noiul interes pentru celulele derivate din lichidul amniotic a fost inițiat de două descoperiri independente. În 2001, s-a sugerat că celulele din lichidul amniotic ar putea fi utilizate în abordări de inginerie tisulară pentru repararea chirurgicală a anomaliilor congenitale în perioada perinatală. Autorii au izolat mecanic o subpopulație de celule din lichidul amniotic al oilor gestante cu o morfologie distinctă. Profilul imunocitochimic al acestor celule a fost foarte comparabil cu cel al celulelor de linie mezenchimală, fibroblaste/miofibroblaste. Prezentând o proliferare semnificativ mai rapidă decât celulele fetale și adulte comparabile, aceste celule derivate din lichidul amniotic au putut fi cultivate pe schele de polimer de acid poliglicolic până la straturi de celule confluente. Inițial, s-a discutat că o astfel de construcție modificată ar fi optimă pentru a funcționa ca grefă pentru implantare fie în perioada neonatală, fie chiar înainte de naștere. Acest lucru ar putea fi deosebit de interesant pentru copiii născuți cu un defect al peretelui corporal, care sunt prea mici pentru ca o grefă să fie prelevată din altă parte a corpului lor pentru o intervenție chirurgicală de reconstrucție . Rezultatele obținute pe modele animale sunt într-adevăr încurajatoare. Cu toate acestea, după cunoștințele noastre, nu avem cunoștință de un raport care să descrie utilizarea clinică a unei astfel de abordări terapeutice pe bază de celule la om până în prezent.
O altă descoperire privind celulele din lichidul amniotic a inițiat un domeniu de cercetare foarte promițător și în creștere rapidă. Cu aproape zece ani în urmă, a fost publicată prima sugestie privind lichidul amniotic uman ca o nouă sursă putativă de celule stem . Prima dovadă a existenței celulelor AFS a fost demonstrată prin descoperirea unui tip de celule foarte proliferative în lichidul amniotic uman care exprimă markerul celulelor stem pluripotente Oct4. Pe lângă faptul că aceste celule exprimă markeri cunoscuți ca fiind specifici pentru celulele stem pluripotente, s-a dovedit că ele exprimă proteine ale ciclului celular cunoscute ca fiind specifice pentru celulele ciclice . După această primă descriere, multe grupuri au confirmat existența acestor celule AFS Oct4+/c-Kit+ și au raportat potențialul lor de a se diferenția în celule hematopoietice, neurogene, osteogene, condrogene, adipogene, renale, hepatice și în diverse alte linii genetice . Deși, în ceea ce privește proprietățile lor biologice și modelul de exprimare a markerilor, celulele AFS par a fi mai asemănătoare cu celulele stem embrionare (ES) decât, de exemplu, cu celulele trofoblaste, originea exactă a celulelor AFS rămâne evazivă. Investigațiile biochimice, imunocitochimice, biologice și morfologice au arătat că celulele AFS reprezintă o entitate nouă și specifică, fiind distincte de celulele ES sau de alte tipuri de celule stem, cum ar fi cele care pot fi izolate din surse epiteliale amniotice sau trofoblastice. În prezent, este de mare interes să clarificăm două întrebări relevante cu privire la celulele AFS. De unde provin acestea? Au ele o funcție biologică in vivo? Am discutat deja anterior despre faptul că celulele AFS ar putea juca probabil un rol în procesele de vindecare a rănilor intrauterine. Cu toate acestea, până în prezent nu există niciun suport experimental pentru această ipoteză. Este evident că mediile experimentale care să permită demonstrarea acestei ipoteze nu sunt cu adevărat ușor de imaginat sau practice în acest moment (sau încă nu au fost dezvoltate).
De la prima lor descoperire, a fost de cea mai mare importanță să se clarifice întrebarea dacă celulele AFS dețin într-adevăr un potențial de diferențiere pluripotentă prin inițierea cu succes a diferențierii în diferite linii genetice pornind de la o singură celulă stem. Este relevant de remarcat faptul că multe rapoarte diferite din literatura de specialitate care pretind că descriu cercetări asupra celulelor AFS nu au clarificat nici măcar cu ce fel de celule lucrează. Destul de des, cercetătorii au folosit doar un amestec de celule din lichidul amniotic obținut prin proceduri de cultivare specifice. Cu toate acestea, după cum s-a menționat mai sus, astfel de amestecuri de celule derivate din lichid amniotic conțin o mare varietate de tipuri specifice de celule nediferențiate și diferențiate. Ori de câte ori un studiu raportează un potențial de diferențiere asupra unor linii celulare specifice, este de cea mai mare relevanță să se clarifice mai întâi ce tip de celule de plecare a fost utilizat (prin caracterizare biologică și imunocitochimică detaliată). În plus, dovada că celulele AFS au într-adevăr un potențial de diferențiere pluripotentă poate fi obținută doar pornind de la o singură celulă caracterizată ca fiind o celulă stem. În orice alt caz, s-ar putea presupune că un amestec de celule din lichidul amniotic, care a fost utilizat ca material de plecare, conținea foarte probabil un tip de celule cu potențial de diferențiere într-o anumită stirpe și alte tipuri de celule cu alte potențiale de diferențiere. Sau protocolul de diferențiere in vitro utilizat în unele studii a indus o selecție (prin intermediul unui avantaj de creștere) pentru un tip celular deja diferențiat (inclus), mai degrabă decât diferențierea de bună credință. Abordările cu o singură celulă sunt obligatorii și practice după experimentele de diluție minimă.
Primul grup de cercetare, care a ținut cont cu adevărat de acest lucru, a raportat că, coborând de la o singură celulă AFS oct4-pozitivă, a fost posibilă inducerea diferențierii adipogenice, osteogenice și neurogenice . Autorii au folosit un protocol de cultură în două etape, urmat de o caracterizare imunocitochimică detaliată a tipului de celule stem obținut . Trei ani mai târziu, un alt grup de cercetare a izolat celule AFS monoclonale prin selecție citometrică în flux și diluție minimă, care exprimau markerii celulelor stem c-Kit și Oct4 . Autorii au descris prima stabilire a unor linii celulare AFS monoclonale, cu un potențial proliferativ ridicat, care ar putea fi cultivate pentru mai multe perioade de ciclism cu un statut cromozomial stabil. Utilizarea unor astfel de linii celulare AFS le-a permis să demonstreze că poate fi indusă diferențierea celulelor adipogenice, osteogenice, miogenice, endoteliale, neurogenice și hepatice. În mod important, acești autori au raportat, de asemenea, că celulele AFS, spre deosebire de celulele ES, nu induc formarea de tumori la șoarecii cu imunodeficiență combinată severă (SCID) (pentru o discuție detaliată a acestui aspect, a se vedea mai jos) .
Celele ES, atunci când sunt cultivate în absența factorilor de diferențiere, pot forma în mod spontan agregate multicelulare tridimensionale numite corpuri embrioide. În trecut, corpurile embrioide au fost considerate pe scară largă ca fiind un punct de plecare optim pentru diferențierea celulelor stem în diverse linii genetice. În consecință, formarea de corpuri embrioide urmată de diferite abordări care induc diferențierea este văzută ca o modalitate adecvată de a dovedi potențialul de diferențiere pluripotentă a unui anumit tip de celule stem. În consecință, a fost interesant să testăm dacă, pornind de la o singură celulă, celulele AFS sunt capabile să formeze corpuri embrioide. Într-adevăr, celulele AFS monoclonale umane pot forma corpuri embrioide, atunci când sunt cultivate fără factori de antidiferențiere, în condiții în care nu se pot atașa la suprafața vaselor de cultură și fără contact cu celulele de hrănire. Formarea unor astfel de agregate multicelulare tridimensionale este însoțită de o scădere a expresiei markerilor celulelor stem și de inducerea diferențierii în diferite linii genetice . Acest studiu care demonstrează potențialul de a forma corpuri embrioide a fost dovada definitivă a faptului că celulele AFS sunt pluripotente. În plus, acesta permite acum recapitularea și investigarea structurilor tridimensionale și a contextelor la nivel tisular ale multor fenomene de diferențiere în timpul embriogenezei timpurii a mamiferelor . Aceste constatări privind pluripotența celulelor AFS au fost obținute folosind linii de celule monoclonale generate prin sortare celulară magnetică și abordări de diluție minimă din probe de amniocenteză umană. În prezent, există multe linii monoclonale diferite stabilite, care pot fi extinse ca celule stem imature cu o rată de proliferare ridicată în cultură, fără a fi nevoie de celule de hrănire .
În ansamblu, stadiul actual al cunoștințelor este că celulele AFS adăpostesc potențialul de a se diferenția în tipuri de celule din cele trei straturi germinative (ectoderm, mezoderm și endoderm) și pot forma corpuri embrioide, cunoscute ca principala etapă în diferențierea celulelor stem pluripotente. În comparație cu alte tipuri de celule stem, cum ar fi celulele stem adulte, celulele ES sau celulele stem pluripotente induse (iPS), celulele AFS prezintă avantaje specifice. Celulele stem adulte sunt adesea greu de prelevat, prezintă un potențial de diferențiere mai scăzut decât celulele AFS și nu pot fi cultivate cu o activitate proliferativă ridicată. Generarea de linii de celule ES prin distrugerea unui embrion uman ridică o serie de probleme etice, care sunt discutate diferit de la o țară la alta. În plus, celulele ES sunt tumorigene, în timp ce celulele AFS, așa cum s-a menționat deja mai sus, nu induc formarea de tumori la șoarecii cu imunodeficiență combinată severă. În comparație cu celulele iPS, nu este necesară o inducție ectopică a pluripotenței în cazul celulelor AFS. Celulele AFS sunt stabile din punct de vedere genomic și nu adăpostesc memoria epigenetică și nici mutațiile somatice ale celulelor sursă deja diferențiate. În plus, s-a raportat că celulele iPS acumulează anomalii cariotipice și mutații genetice în timpul propagării în cultură. Recent, s-a raportat că, în timpul inducerii ectopice a pluripotenței, celulele iPS nu recapitulează decât incomplet modelul lor epigenetic. Această constatare importantă trebuie luată în considerare atunci când aceste celule sunt planificate pentru a fi utilizate pentru investigații detaliate privind procesele de diferențiere, precum și atunci când sunt luate în considerare pentru noi abordări terapeutice presupuse. Celulele AFS prezintă deja proprietăți de celule stem și nu au nevoie de inducerea ectopică a pluripotenței. În plus, celulele AFS prezintă deja modelul epigenetic al celulelor stem. În concluzie, nu este surprinzător faptul că multe încercări se concentrează în prezent asupra întrebării în ce condiții celulele AFS ar putea fi utilizate pentru terapii bazate pe celule stem. În plus, în prezent, celulele AFS sunt din ce în ce mai acceptate ca un instrument optim pentru cercetarea fundamentală .
Deși se consideră că celulele ES, celulele iPS și celulele AFS au un potențial de diferențiere pluripotentă, întrebarea dacă acestea prezintă același spectru calitativ al potențialului de diferențiere rămâne fără răspuns. Celulele stem pluripotente sunt definite ca fiind celule autoreplicante (celulele se pot diviza per se) cunoscute ca având capacitatea de a se dezvolta în celule și țesuturi din straturile germinative primare, ectoderm, mezoderm și endoderm. S-a demonstrat că aceste trei tipuri de celule stem (celule ES, iPS și AFS) au potențialul de a se diferenția în celule din cele trei straturi germinale. Toate trei pot, de asemenea, să formeze corpuri embrioide. Cu toate acestea, trebuie testat de la caz la caz dacă acestea au într-adevăr un potențial comparabil de a se diferenția într-un anumit tip de celule cu toate funcțiile sale biologice cunoscute. De fapt, considerăm că este necesar să examinăm și să comparăm în mod direct potențialul lor de diferențiere și să selectăm cele mai potrivite tipuri de celule pentru proiectele științifice de bază și pentru utilizarea presupusă în noile terapii bazate pe celule stem. În plus, o diferență evidentă între aceste trei tipuri de celule stem pluripotente ar trebui să fie investigată mai detaliat în viitor. Încă de la prima descriere a cultivării lor in vitro, celulele ES sunt cunoscute ca fiind tumorigene. În mod similar, celulele iPS induc formarea de tumori, atunci când sunt transplantate subcutanat în șoareci nude. Cu toate acestea, s-a raportat că celulele AFS nu formează tumori la șoarecii cu imunodeficiență combinată severă. Având în vedere că acesta din urmă a fost studiat până în prezent doar în cadrul unui singur proiect care a analizat un set specific de transplanturi pe animale, sunt justificate investigații suplimentare pentru a clarifica dacă celulele AFS nu sunt într-adevăr tumorigene. Evident, în cazul în care acest lucru este adevărat, acesta ar fi un avantaj important față de celulele ES și iPS, cel puțin în ceea ce privește o presupusă utilizare clinică .
2. Celule AFS pentru terapie: Perspective viitoare
Mult din entuziasmul din jurul celulelor stem umane este legat de speranța clinicienilor și a pacienților că aceste celule vor putea fi folosite cândva pentru terapii celulare pentru un spectru larg de boli umane. Aici trebuie să se precizeze în mod clar că activitatea privind terapiile pe bază de celule AFS se află încă în fază incipientă. Multe întrebări sunt în prezent în curs de investigare și, până în prezent, nicio abordare terapeutică bazată pe celulele AFS nu a atins nivelul de aplicare clinică de rutină. Cu toate acestea, o varietate de noi rezultate ale cercetărilor oferă dovezi puternice că celulele AFS ar putea într-adevăr servi ca un instrument puternic în medicina regenerativă .
De exemplu, insuficiențele renale acute și cronice sunt afecțiuni cu rate ridicate de morbiditate și mortalitate. Transplantul de rinichi rămâne cea mai eficientă opțiune de tratament pentru majoritatea pacienților cu insuficiență renală în stadiu terminal. Din păcate, lipsa de organe compatibile este un factor foarte limitativ. Strategiile de tratament se bazează, de asemenea, pe dializa renală convențională, dar rata de mortalitate a pacienților care necesită dializă cronică este ridicată. În consecință, s-a pus în evidență utilizarea presupusă a celulelor stem în repararea leziunilor renale. Mai multe studii publicate recent privind diferențierea renală a celulelor AFS fac tentantă speculația că aceste celule stem ar putea fi considerate o dată ca o nouă sursă promițătoare pentru terapiile pe bază de celule pentru repararea leziunilor renale și justifică investigații suplimentare în această direcție. Utilizând un test de reagregare a rinichilor, am publicat recent că celulele AFS au potențialul de a se diferenția pe linii nefrogenice și că această capacitate depinde de calea de semnalizare mTOR (mammalian target of rapamycin) (a se vedea, de asemenea, discuția de mai jos). Alții au demonstrat că celulele AFS umane se pot integra în țesuturile renale atunci când sunt injectate în rinichi embrionari murini izolați sau că injectarea de celule AFS în rinichii afectați ai șoarecilor cu necroză tubulară acută legată de rabdomioliză poate avea un efect protector. Deși aceste și alte date fac tentantă speculația că celulele AFS ar putea oferi abordări alternative de succes pentru tratamentul, de exemplu, al necrozei tubulare acute, trebuie să se răspundă la multe alte întrebări înainte ca astfel de terapii pe bază de celule să poată fi luate în considerare pentru aplicații de rutină la om.
Din mai multe motive diferite, stabilirea de noi terapii pe bază de celule stem pentru patologii ale sistemului nervos central, până acum incurabile, cum ar fi boala Parkinson, leziuni ale măduvei spinării, scleroza multiplă sau accidentul vascular cerebral, este, de asemenea, de mare interes. Celulele stem neuronale, care au fost investigate în acest scop, pot fi găsite în sistemul nervos central adult și în embrionul în curs de dezvoltare, dar aceste țesuturi nu sunt ușor de obținut și ridică probleme de ordin etic. În ultimii ani, diferite grupuri au raportat potențialul de diferențiere neurogenă a celulelor AFS. Cu toate acestea, înainte de a se putea lua în considerare următorii pași în direcția utilizării clinice a abordărilor bazate pe celule AFS, trebuie să se demonstreze că AFS pot într-adevăr să formeze neuroni maturi. De fapt, există încă o dezbatere în curs de desfășurare în literatura de specialitate, în care se discută dacă celulele AFS sunt într-adevăr capabile să formeze neuroni funcționali. În viitorul apropiat, va fi foarte important să aflăm ce fel de tipuri de celule neurogenice pot fi dezvoltate din celulele AFS. Întrebarea dacă celulele AFS se pot diferenția în neuroni maturi funcționali trebuie investigată prin analizarea capacității de a declanșa potențiale de acțiune sensibile la tetrodotoxină cu forma și durata caracteristice sau prin demonstrarea comunicării sinaptice prin microscopie electronică .
Aici, ar fi posibil să discutăm mai multe exemple de abordări terapeutice presupuse folosind celule AFS. Uneori se susține că trebuie investigate multe întrebări de bază privind originea, tumorigenicitatea, potențialul de diferențiere, starea epigenetică sau stabilitatea genomică înainte ca celulele AFS să poată fi considerate în continuare ca instrument terapeutic. Cu toate acestea, noi credem că toate aceste aspecte ar trebui studiate în paralel. În plus, pentru considerații viitoare este cu adevărat important să se compare cantitativ și calitativ toate aceste proprietăți ale celulelor AFS cu cele ale altor tipuri de celule stem pluripotente sau adulte.
3. AFS Cells in Basic Science: Perspective viitoare
Celele stem sunt instrumente foarte utile pentru a studia reglarea moleculară și celulară a proceselor de diferențiere. O abordare pentru a afla mai multe despre rolul, de exemplu, al unei gene specifice pentru un anumit proces de diferențiere este de a anula expresia endogenă a genei de interes. O astfel de abordare permite clarificarea rolului expresiei genei modulate pentru potențialul celulei de a se diferenția într-o anumită linie genetică. Am publicat recent un protocol pentru o silențiere genetică prelungită eficientă mediată de siRNA în celulele AFS . Acest protocol, pe care l-am testat deja pentru o varietate de gene diferite, permite o reducere cu 96-98% a expresiei genei endogene pe o perioadă de timp de aproximativ 14 zile în celulele AFS și într-o varietate de alte celule primare, imortalizate sau transformate .
Mai recent, am utilizat această abordare pentru a studia rolul căii mTOR în celulele AFS umane. Dereglarea regulatorilor din amonte ai mTOR, cum ar fi, de exemplu, Wnt, Ras, TNF-α, PI3K sau Akt, este un semn distinctiv în multe cancere umane. Mutațiile în genele componente ale căii mTOR TSC1, TSC2, LKB1, PTEN, VHL, NF1 și PKD1 declanșează dezvoltarea sindroamelor genetice umane: scleroza tuberoasă, sindromul Peutz-Jeghers, sindromul Cowden, sindromul Bannayan-Riley-Ruvalcaba, boala Lhermitte-Duclos, sindromul Proteus, boala von Hippel-Lindau, neurofibromatoza de tip 1 și boala polichistică de rinichi. Pe lângă o varietate de afecțiuni cu o singură genă și de tumorigeneză, calea mTOR s-a dovedit a fi, de asemenea, relevantă pentru dezvoltarea unor boli complexe, cum ar fi hipertrofia cardiacă, obezitatea sau diabetul de tip 2. Toate aceste consecințe patologice ale unei activități mTOR dereglate sunt explicabile, având în vedere că mTOR este componenta cheie a cascadei de semnalizare a insulinei, care este implicată într-o mare varietate de procese diferite, cum ar fi creșterea celulară, proliferarea, metabolismul, transcripția, traducerea, supraviețuirea, autofagia, îmbătrânirea, diferențierea și oncogeneza . Am constatat că întregul proces de formare a corpului embrioid al celulelor AFS depinde de ambele enzime care conțin mTOR, mTORC1 și mTORC2 . După cum s-a menționat mai sus, modularea componentelor mTOR prin abordări specifice siRNA a arătat că potențialul celulelor AFS de a contribui la formarea țesutului renal este reglementat de această cale de semnalizare . Mai recent, abordarea de reducere a funcțiilor genelor endogene în celulele AFS ne-a permis să detectăm că cei doi regulatori mTOR, tuberina și PRAS40, sunt gardieni antiapoptotici în timpul diferențierii timpurii a celulelor AFS umane . Împreună, credem cu tărie că abordarea de reducere a expresiei genelor endogene mediată de siRNA în liniile celulare monoclonale umane AFS este un instrument foarte puternic pentru viitoarele proiecte care se ocupă cu reglarea moleculară a diferențierii .
Un alt aspect foarte interesant pentru viitoarele cercetări de bază este banca de linii celulare AFS purtătoare de mutații naturale, care sunt relevante pentru anumite fenotipuri patologice umane. În genetica medicală, dezvoltarea viitoare a unor noi strategii profilactice și terapeutice depinde în mod direct de o mai bună înțelegere a mecanismelor prin care variația genetică naturală contribuie la boală . În țările în care este legal să se utilizeze embrioni umani pentru cercetare, liniile de celule ES purtătoare de anumite defecte ereditare sunt generate din embrioni cu tot felul de anomalii cromozomiale numerice sau mutații specifice bolilor monogenice excluse de la transferul în uter după diagnosticul genetic preimplantațional . De asemenea, a fost deja generată o varietate de linii iPS provenite din tulburări monogenice, sindroame cromozomiale și boli complexe, cu scopul de a le utiliza pentru proiecte de cercetare fundamentală . Cu toate acestea, după cum s-a discutat deja în detaliu, atât celulele ES, cât și celulele iPS prezintă dezavantaje relevante în comparație cu celulele AFS. Pe lângă alte abordări invazive, amniocenteza este o procedură standard de îngrijire prenatală larg acceptată încă din anii 1970. Este aproape imprevizibil câte amniocenteze sunt efectuate anual în întreaga lume. Împreună, considerăm că generarea și păstrarea în bănci a liniilor de celule AFS umane normale și a liniilor de celule AFS cu aberații cromozomiale, precum și a liniilor de celule AFS cu mutații specifice bolilor monogenice ar putea oferi instrumente foarte puternice pentru modelarea bolilor în cercetările viitoare. În acest sens, este important de remarcat faptul că depozitarea de celule AFS în alte scopuri decât cele de cercetare, cu scopul de a proteja sănătatea unui copil prin disponibilitatea celulelor stem pe tot parcursul vieții sale, este altceva. Unele companii din Europa și SUA se oferă deja să pună în bancă celule AFS, atunci când, de exemplu, se efectuează o amniocenteză pentru diagnosticul prenatal. Argumentele lor în favoarea păstrării celulelor AFS sunt că aceste celule ar putea ajuta la tratarea leziunilor (de exemplu, la repararea cartilajului pentru genunchi), la vindecarea rănilor sau la dezvoltarea pielii pentru grefe specifice. După cum s-a menționat anterior, în viitor, sunt necesare cercetări extinse pentru a stabili utilizarea clinică presupusă a celulelor stem AFS la om. Rezultatele promițătoare obținute în ultimii câțiva ani în acest domeniu științific încă tânăr justifică în mod clar continuarea cercetărilor detaliate în direcția aplicării clinice presupuse a celulelor AFS. În această lucrare am dori să subliniem faptul că depozitarea de celule AFS cu mutații naturale pentru cercetarea genetică umană ar trebui să înceapă cât mai curând posibil în diferite laboratoare, în conformitate cu standarde de calitate comparabile. Ar merita să încurajăm diferite laboratoare să preleveze probe de lichid amniotic din amniocenteza cu indicații comparabile din săptămâni similare de sarcină. Ar trebui standardizate protocoalele de izolare a celulelor stem, de realizare a unor diluții minime și de caracterizare a liniilor de celule monoclonale AFS astfel obținute. Biobancarea liniilor de celule AFS cu mutații caracterizate ar permite să se treacă la următoarea etapă a cercetării genetice umane cu ajutorul celulelor stem umane.