Ce este colorarea imunohistochimică (IHC)?

Imunohistochimia utilizează anticorpi pentru a detecta un antigen în celule sau țesuturi. Beneficiul major al imunocolorației în imunohistochimie (IHC) este capacitatea de a vedea ținta dorită într-o probă de țesut, păstrând în același timp contextul spațial și arhitectura tisulară.

Colorația imunohistochimică (IHC): Scurtă definiție

Tipuri de colorare

Inmunocolorația poate fi efectuată fie direct, fie indirect. Conjugarea anticorpilor noștri validați pentru aplicații cu un număr de fluorofori permite marcarea directă. Pentru a parcurge oferta noastră de conjugate directe, faceți clic aici.

De multe ori, pe baza nivelurilor de expresie a antigenului și a accesibilității, un conjugat direct nu este suficient pentru a vizualiza ținta de interes. În aceste cazuri, se utilizează marcarea indirectă cu ajutorul unui anticorp secundar. Metoda preferată la CST este de a utiliza reactivi de detecție pe bază de polimeri, într-o singură etapă, foarte sensibili, specifici pentru IgG de iepure sau de șoarece.

Exemple de colorare IHC

Câteva exemple de colorare IHC efectuate la CST sunt prezentate mai jos. Fiecare dintre anticorpii utilizați mai jos a fost supus procesului nostru riguros de validare pentru a evalua cu încredere detectarea specifică a antigenului dorit.

Cum se face colorarea imunohistochimică (IHC)?

Pregătirea țesuturilor

Procedurile de colectare, conservare și fixare a țesuturilor variază în funcție de eșantion sau de ținta de interes. Colectarea și fixarea țesutului afectează în mod direct integritatea eșantionului și rezultatele dumneavoastră experimentale.

Fixatorii de reticulare, cum ar fi formalina, sunt adesea utilizați pentru a pregăti eșantioanele pentru IHC, deoarece păstrează integritatea structurală a țesutului, ceea ce ajută la menținerea arhitecturii tisulare. O altă opțiune este crioprezervarea (congelarea) probelor dumneavoastră, care poate fi o opțiune mai bună dacă încercați să detectați o țintă fosforilată.

Recuperarea antigenului (epitopului)

Fixativele utilizate pentru a păstra integritatea structurală a probei de țesut au, de asemenea, dezavantaje prin faptul că pot îngropa epitopul pe care anticorpul dumneavoastră este proiectat să îl recunoască.

Există mai multe metode pentru a dezvălui epitopi care au fost mascați de fixare. Acestea includ recuperarea antigenului indusă de proteolitice, care se bazează pe o enzimă precum proteinaza K, sau recuperarea epitopului indusă de căldură (HIER), care utilizează căldura pentru a rupe legăturile reticulate și a derula proteinele. Oricare dintre cele două metode poate demasca epitopi, făcându-i accesibili anticorpului primar și susceptibili de a fi colorați prin IHC.

La CST, metoda noastră cea mai frecventă de recuperare a antigenului este HIER. Cu toate acestea, cercetătorii noștri testează mai multe metode de recuperare a antigenului pentru a determina condițiile optime de utilizare a fiecărui anticorp în IHC. Protocolul recomandat de CST poate fi găsit pe fișa tehnică a oricărui anticorp validat pentru IHC.

Legăturarea anticorpilor

Selectarea anticorpului potrivit este unul dintre cei mai importanți pași în obținerea unui rezultat IHC reușit. Toți anticorpii validați IHC de la CST sunt verificați nu numai ca având un semnal puternic în țesut, ci sunt supuși unei proceduri de validare riguroase pentru a confirma specificitatea semnalului. Cercetătorii noștri, specializați în IHC, testează un număr mare de anticorpi și îi recomandă doar pe cei mai potriviți pentru aplicație.

Click aici pentru a răsfoi anticorpii validați IHC pentru ținta dumneavoastră.

Sisteme de detecție

Colorarea imunohistochimică (IHC) permite 2 clase largi de detecție: 1) cromogenică și 2) fluorescentă. Pentru detecția cromogenică, CST recomandă utilizarea sistemelor pe bază de polimeri care evită limitările sistemului pe bază de biotină, crescând în același timp sensibilitatea testului.

Încercați SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, iepure) #8114 sau SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, șoarece) #8125, în funcție de specia gazdă a anticorpului dumneavoastră primar.

Contracolorare

După detectarea anticorpilor, mulți cercetători preferă să contracoloreze țesutul pentru a vizualiza anatomia celulară și pentru a orienta privitorul cu privire la colorarea specifică. La CST, noi ne contrasemnăm probele folosind Hematoxilina #14166, care colorează nucleul în albastru. Atunci când alegeți o contracolorație, este important ca aceasta să fie compatibilă cu cromogenul dumneavoastră. De exemplu, dacă culoarea contraloviturii este prea asemănătoare cu culoarea cromogenului, semnalul anticorpului va fi dificil de recunoscut.

Protocol de colorare imunohistochimică (IHC)

Mai jos este o prezentare generală a protocolului nostru recomandat și sunt evidențiați pașii cheie pentru un experiment de succes. CST își propune să vă ajute să vă îmbunătățiți analizele IHC prin furnizarea de anticorpi și reactivi validați pentru a vă permite să urmați un protocol simplu, specific produsului și să obțineți rezultate reproductibile cu o optimizare minimă necesară.

Vizionați videoclipul cu protocolul IHC sau vizitați pagina noastră de selecție a protocolului.

.