Struktura chemiczna HEPES = N-(2-hydroksyetylo)
piperazyna-N’-
(kwas 2-etanosulfonowy)
piperazyna-N’-
(kwas 2-etanosulfonowy)
HEPES jest powszechną chemiczną substancją buforującą, podobną do Tris w buforach Tris-HCl i fosforanów w PBS. Bufory są używane do utrzymania pH na określonej wartości i mogą „buforować” dodawanie małych ilości kwasów/zasad.
Właściwości HEPES
Stabilne pH w zależności od temperatury, brak pierwszorzędowych grup aminowych, brak chelatowania metali, zakres pH bliski fizjologicznemu. HEPES jest często używany do utrzymania rozpuszczalności białek w eksperymentach biochemicznych.
- pKa w 25C 7,55 (7,31 w 37C); (2. pKa przy pH 3 nie jest przedmiotem zainteresowania)
- użyteczny zakres buforowania od 6.8 do 8,2
- masę cząsteczkową 238,3 g/mol
- ΔpKa/ΔT = -,014
- HEPES zawiera aminy trzeciorzędowe, które są reaktywne w pewnych warunkach.
- Wzór chemiczny: C8H18N2O4S; kwas N-(2-hydroksyetylo)-piperazyno-N’-(2-etanosulfonowy); vel kwas 4-(2-hydroksyetylo)-1-piperazynoetanosulfonowy; numer CAS: 7365-45-9
Bufory są zwykle 1 M, przygotowane przez zobojętnienie HEPES wodorotlenkiem sodu. HEPES jest zasadniczo nierozpuszczalny, dopóki nie zostanie zneutralizowany.
1M HEPES KOH bufor 7.5
- 700 ml wody ultraczystej
- 238.3 g granulek HEPES
- KOH (wodorotlenek potasu) w celu dostosowania pH do 7,5
- do 1L wody ultraczystej; sterylizować przez filtrację
1M HEPES-NaOH pH 7.5
- 700 ml wody ultraczystej
- 238,3 g HEPES
- ~5,5 g granulek NaOH (wodorotlenek sodu) w celu dostosowania pH do 7,5
- do 1L w wody ultraczystej; sterylizować przez filtrację
Linki
- oryginalne publikacje: Good’66 PMID 5942950, Good’74 PMID 4206745, Blanchard’84 PMID 6717292
- Wikipedia: buffer solution
- CP: common buffers
- List of common buffers from Smith College
.