GFP

Green Fluorescent Protein (GFP) は、クラゲAequorea victoriaから発見された238アミノ酸からなる単一ポリペプチド遺伝子産物であります。 このタンパク質は、特定の照明条件下で天然の緑色蛍光を発します。 このタンパク質は、一次アミノ酸配列中のSer-Tyr-Glyの環化により生物学的な発光を示す。 GFPは非常に安定で、多くの化学的処理および処置に耐えることができます。1 この蛍光タンパク質が異種システムで発現できることを最初に示したのは、線虫でした2。 この最初の報告以来、GFPレポーター遺伝子の発現はマウスを含む複数の生物で報告されています4。さらに、特定のプロモーターの指示により、トランスジェニックGFPマウスは組織や細胞特異的に蛍光タンパク質を発現することができます。 5

GFP の生物学的発光を可視化する方法は数多く存在します。 蛍光を検出する方法として、手持ちのUVライト(365 nM)を使用する方法があります。 Fisher社から100ドルから200ドル程度の価格帯でいくつかの機種が提供されています。 GFPXトランスジェニック株(Stock 003116)では、手持ちのUVライトの方法はあまりうまくいきません。 GFPXおよびGFPU遺伝子導入株(Stock 003115および003116)の寄贈者であるAndras Nagy博士は、現在市販されているビューワーヘッドセットおよび顕微鏡適応フィルターについて述べています。 Enhanced GFP (EGFP)は、哺乳類細胞でより高レベルに発現し、より強く蛍光を発するように設計されたものである。 シアン蛍光タンパク質(CFP)および黄色蛍光タンパク質(YFP)はGFPのスペクトル変異体で、複数の細胞タイプを同時に標識することが可能です。 1995. 緑色蛍光タンパク質の理解、改良、および使用。 1994. 遺伝子発現のマーカーとしての緑色蛍光タンパク質。 サイエンス 263:802-5.

Hoffman RM. 2002. マウスにおける腫瘍細胞の緑色蛍光タンパク質イメージング。

Okabe M, Ikawa M, Kominami K, Nakanishi T, Nishimune Y. 1997. ユビキタスグリーン細胞の供給源としての「グリーンマウス」. FEBS Lett 407:313-9.

Yang M, Baranov E, Jiang P, Sun FX, Li XM, Li L, Hasegawa S, Bouvet M, Al-Tuwaijri M, Chishima T, Shimada H, Moossa AR, Penman S, Hoffman RM. 2000. 緑色蛍光タンパク質を発現する腫瘍および転移の全身光画像化。 Proc Natl Acad Sci USA 97:1206-11.

lacZ

レポーター遺伝子の使用により、組織、胚、または成体マウス内の特定のプロモーターの遺伝子発現の空間パターンを調べることができる1 大腸菌lacZ遺伝子は、トランスジェニック技術によりマウスゲノムに組み込まれると、導入遺伝子発現カセットの所定のプロモーター/エンハンサーの制御下でレポーター遺伝子として使用され得る。 lacZ遺伝子は、ラクトースを切断してガラクトースとグルコースを生成する触媒であるβ-ガラクトシダーゼをコードしている。 β-ガラクトシダーゼ活性は、β-ガラクトシダーゼ基質であるX-galとインキュベートすることにより、in situおよびin vitroの技術で確認することができる。β-ガラクトシダーゼは発色性基質のX-galを切断し、不溶性の青い色素となり、lacZ活性を有する細胞の同定を可能にする2 。その後遺伝子組み換え動物を使って、プロモータまたはエンハンサーの発現プロファイルに変化を与える要因や条件を特定できる<1479>。

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