Abstract
Obiettivo. Chiarire l’effetto del Lactobacillus plantarum 299v sul cortisolo salivare e sui livelli di IgA salivari in giovani adulti sotto stress da esame. Disegno. Quarantuno studenti con un imminente esame accademico sono stati inclusi in uno studio randomizzato in doppio cieco, controllato con placebo. I batteri probiotici o il prodotto placebo sono stati somministrati in capsule una volta al giorno per 14 giorni. La saliva è stata raccolta e un test di stress percepito è stato compilato in ogni occasione di campionamento. La saliva è stata raccolta per l’analisi del cortisolo mediante test di immunoassorbimento in elettrochimica (ECLI) e le IgA salivari sono state analizzate mediante saggio di immunoassorbimento legato all’enzima (ELISA). Abbondanza di lattobacilli è stato valutato da coltivazione di saliva su terreno selettivo e identificazione di L. plantarum 299v è stato fatto su colonie selezionate a caso da un’amplificazione casuale del DNA polimorfo (RAPD) tipizzazione. Risultati. Una differenza significativa nei livelli di cortisolo è stata trovata tra il gruppo di trattamento e il gruppo placebo (), insieme ad un aumento significativo dei livelli di lattobacilli nel gruppo di trattamento rispetto al gruppo placebo (). Nessun cambiamento significativo è stato trovato per le IgA salivari. Conclusioni. Un batterio probiotico con capacità di ridurre i sintomi della sindrome dell’intestino irritabile (IBS) ha vietato l’aumento dei livelli del marcatore di stress cortisolo durante il periodo di esame. Il numero di registrazione dello studio è NCT02974894, e lo studio è registrato su ClinicalTrials.gov.
1. Introduzione
C’è una connessione tra il tratto digestivo e lo stress fisiologico e il cortisolo salivare e l’immunoglobulina A salivare (IgA salivare) possono essere presi come marcatori di stress. Il cortisolo è un ormone steroideo rilasciato dalle surrenali in risposta allo stress e l’aumento dei livelli è stato collegato alla soppressione del sistema immunitario. Le IgA salivari fanno parte della difesa immunitaria orale e sono l’anticorpo più abbondante nella saliva, prevalentemente sotto forma di IgA secretorie. Le ghiandole salivari minori, posizionate in tutta la mucosa orale, secernono circa il 30-35% di tutte le IgA salivari presenti nella saliva intera degli adulti.
I probiotici sono definiti come “microrganismi vivi che, se somministrati in quantità adeguate, conferiscono un beneficio alla salute dell’ospite”. L. plantarum 299v ha mostrato in studi precedenti un effetto positivo sui sintomi della sindrome dell’intestino irritabile (IBS) come gonfiore e dolore. Questo ceppo ha anche dimostrato di contrastare la perdita intestinale che a sua volta potrebbe attenuare la risposta dell’asse ipotalamo-ipofisi-surrene (HPA) allo stress. Non sono stati condotti studi precedenti sull’effetto di L. plantarum 299v sulle condizioni legate allo stress. Tuttavia, è stato dimostrato in cuccioli di ratto stressati dalla separazione dalla madre che una miscela probiotica di Lactobacillus rhamnosus R0011 e Lactobacillus helveticus R0052 ha diminuito significativamente i livelli di corticosterone, l’analogo del cortisolo nel sangue degli animali. Inoltre, i ratti sottoposti a un fattore di stress acuto limitato nel tempo sono diventati meno stressati dopo il trattamento con Lactobacillus farciminis, insieme a una diminuzione dei livelli di lipopolisaccaridi (LPS) nel sangue.
Non si sa molto sugli effetti dei batteri probiotici sui marcatori di stress nella saliva, nonostante il fatto che il campionamento della saliva è un metodo facile e non invasivo che non causa alcun danno o disagio alla persona del test. Questo è particolarmente importante quando si valutano i marcatori di stress dove un aumento acuto potrebbe essere dovuto al metodo di campionamento e non al fattore di stress acuto valutato nello studio. Quando si tratta di effetti probiotici sui livelli di IgA salivari, la maggior parte degli studi sono legati all’incidenza di varie infezioni respiratorie e, in uno studio precedente, è stato riportato che i livelli di IgA secretorie nelle feci sono aumentati in un gruppo di bambini che ricevevano un prodotto contenente L. rhamnosus HN001 rispetto a un gruppo placebo. Risultati simili sono stati ottenuti con il ceppo L. rhamnosus GG.
Lo stress cronico è legato all’aumento dei livelli di cortisolo, ma se il cortisolo sia un agente causale delle reazioni fisiologiche di stress o solo una conseguenza di esso è aperto alla discussione. Il rilascio di cortisolo è una risposta periferica ritardata ad uno stress acuto e si suggerisce che il cortisolo eserciti azioni sia stimolatorie che soppressive sulla risposta allo stress del corpo. Un esempio di un’azione stimolatoria è l’innesco dell’attivazione cardiovascolare; tuttavia, in risposta, per esempio, a un fattore di stress emorragico, il cortisolo sopprime la risposta alla diminuzione del volume dei fluidi inibendo la rapida secrezione iniziale di ormoni dello stress vasocostrittori. Per quanto riguarda le proprietà di regolazione immunitaria del cortisolo, la sua secrezione è suggerito per proteggere contro il “overshoot” della risposta immunitaria altrimenti accadendo in risposta allo stress. Tuttavia, non è ancora chiaro quali scopi l’aumento del livello di cortisolo serve durante la risposta del corpo allo stress.
Nel presente studio l’obiettivo principale era quello di chiarire l’effetto del batterio probiotico Lactobacillus plantarum 299v sul livello di cortisolo salivare in giovani adulti sotto stress da esame. Le IgA salivari delle ghiandole minori e della saliva umana intera sono state misurate come marcatori alternativi di stress. L’ipotesi era che i livelli di cortisolo sarebbero stati ridotti o stabilizzati nel gruppo test, in confronto al gruppo placebo dove ci si aspettava che i livelli di cortisolo aumentassero a causa dello stress indotto dall’esame. Al contrario, ci si aspettava che i livelli di IgA salivari aumentassero nel gruppo test rispetto al gruppo placebo.
2. Materiali e metodi
2.1. Disegno dello studio
Nel presente studio randomizzato, in doppio cieco e controllato con placebo, studenti volontari dell’Università di Lund, di età compresa tra i 18 e i 30 anni, hanno partecipato durante il periodo degli esami. I criteri di esclusione erano la gravidanza e l’assunzione di antibiotici e cortisonici temporanei durante il periodo di studio. Un calcolo della potenza è stato condotto per decidere la quantità di soggetti e 40 individui sono stati considerati sufficienti. 42 giovani adulti sani si sono offerti volontari per lo studio, 28 femmine e 14 maschi, e tutti i partecipanti hanno dato il loro consenso informato firmato per lo studio. Dopo un drop-out maschile, 41 individui hanno completato l’intero periodo sperimentale. A 21 è stato somministrato il prodotto di prova in una dose giornaliera di 1 1010 unità formanti colonie di L. plantarum 299v in capsule (L. plantarum 299v, amido di patate, idrossipropilmetilcellulosa e magnesio stearato, (Probi AB, Lund, Svezia)) e a 20 sono state date capsule placebo, contenenti gli stessi ingredienti del prodotto di prova ad eccezione dei batteri. Prima di iniziare il periodo sperimentale, c’è stato un periodo di wash-out di due settimane in cui i partecipanti sono stati istruiti ad evitare l’assunzione di prodotti probiotici. L’assunzione della capsula è avvenuta una volta al giorno dopo pranzo e ai soggetti è stato chiesto di non mangiare, bere, fumare o prendere il tabacco da fiuto per un’ora dopo l’assunzione. I partecipanti sono stati anche istruiti a masticare la capsula fino a quando la polvere si è dissolta in bocca (minimo 30 secondi) o a svuotare la capsula su un cucchiaio e a masticare la polvere per 30 secondi prima di ingerirla. I campioni di riferimento per tutti i partecipanti sono stati raccolti il giorno 0, prima di qualsiasi assunzione del prodotto. Lo studio è continuato per 14 giorni e la data di inizio è stata decisa individualmente per tutti i partecipanti, in un arco di 1,5 settimane.
2.2. Valutazione psicologica
E’ stata inclusa una valutazione psicologica per permettere ai soggetti del test di valutare il loro stress auto-percepito. È stato utilizzato un questionario con 30 domande sviluppato da Levenstein et al. e il punteggio più basso ottenuto indica un minor grado di stress e viceversa. Un indice che dà un numero tra 0 e 1 è stato calcolato usando la seguente formula:
2.3. Campionamento della saliva
La saliva delle ghiandole minori è stata raccolta dalle aree della mucosa labiale inferiore come descritto in precedenza e la saliva intera è stata raccolta nello stesso giorno di campionamento. Per ridurre l’influenza delle variazioni circadiane nella secrezione di saliva durante la raccolta, tutto il campionamento è stato fatto tra 3 e 5 pm. Tutti i campioni sono stati raccolti il giorno 0 e il giorno 14, e, nei giorni 5 e 10, solo i campioni di cortisolo sono stati presi. I partecipanti sono stati istruiti a non mangiare, bere, fumare, lavarsi i denti o fare qualsiasi tipo di esercizio un’ora prima del prelievo. Anche l’alcol è stato proibito dodici ore prima dell’appuntamento per la raccolta del campione.
2.4. Analisi del cortisolo
Il prelievo della saliva per l’analisi del cortisolo è stato effettuato con una Salivette® per cortisolo (Sarstedt, Germania) ed è stato fatto dopo la raccolta della saliva per l’analisi delle IgA. I partecipanti sono stati istruiti a far circolare la paletta nella bocca per 2-5 minuti, fino a quando non si è riempita di saliva e poi sputarla con attenzione nella provetta. Le provette sono state messe in ghiaccio e successivamente congelate a -20°C fino all’analisi. L’analisi del cortisolo è stata condotta da Labmedicin Skåne (i laboratori universitari e regionali della Regione Skåne, Svezia) ed è stata eseguita secondo l’accreditamento. Il metodo utilizzato è stato un test di competizione in una fase con la tecnica di rilevazione Electrochemiluminescence Immunoassay (ECLI) basata su un derivato del rutenio (Ru) .
2.5. Analisi delle IgA salivari
La saliva delle ghiandole minori è stata raccolta dal labbro inferiore con una striscia SialoPaper® (Oraflow Inc., New York, USA) e posta delicatamente sulla mucosa per 60 s e il volume salivare all’interno della striscia è stato misurato da un Periotron® 8000 (Oraflow Inc., New York, USA). La striscia SialoPaper è stato messo in 1 mL di PBS (1,5 mL PP, Sarstedt, Germania; Phosphate Buffered Saline, Dulbecco A, Oxoid, Inghilterra) su ghiaccio e conservato a -80 ° C fino all’analisi. La saliva intera non stimolata è stata raccolta dopo il campionamento della saliva delle ghiandole minori. I partecipanti si sono seduti, piegandosi leggermente in avanti, e hanno lasciato scolare la saliva in una microprovetta da 2 mL con l’aiuto di una cannuccia sterile (pipette sterili monouso da 1 mL, Kemikalia, Svezia; 2 mL PP, Sarstedt, Germania). Tutti i campioni sono stati conservati a -80 ° C fino all’analisi.
La concentrazione di IgA secreto nella saliva è relativa alla quantità totale di proteine e quindi l’unità % IgA/proteina totale è scelto per rappresentare il risultato dell’analisi saliva intera. Questo è rilevante perché la secrezione di IgA cambia con la velocità di flusso salivare, che a sua volta cambia con stimoli sul sistema nervoso autonomo, ad esempio, stress acuto, stress cronico e riposo. Questo cambiamento nella velocità di flusso è contabilizzato misurando la % IgA/proteina totale nella saliva, che lo rende un metodo accurato quando si confrontano i dati da diversi soggetti di test.
Per analizzare la concentrazione salivare IgA, un sandwich-ELISA modificato è stato eseguito secondo Krzywkowski et al. , utilizzando α1- e α2-catena specifica capra anti-IgA umane (5 μg/mL, Sigma I0884; Sigma Chemical Co, St Louis, MO, USA) coniugato con fosfatasi alcalina (Sigma A9669; diluito 1 : 30.000 in PBST). La concentrazione di proteine totali è stata analizzata da un test di proteina di avvio rapido (BIO-RAD).
Le IgA salivari nella saliva ghiandola minore è stato espresso come mg/100 mL. L’analisi delle IgA salivari è stata condotta presso la Facoltà di Odontologia dell’Università di Malmö (Malmö, Svezia).
2.6. Per analizzare i lattobacilli orali, i soggetti hanno masticato una pallina di paraffina (Orion Diagnostics) per stimolare la secrezione di saliva e la raccolta è stata fatta come per le IgA salivari nella saliva intera. La raccolta di questo campione di saliva è stato fatto alla fine di ogni occasione di campionamento, poiché questo metodo di campionamento dà saliva fortemente stimolato, contrariamente agli altri metodi. Le provette sono state messe in ghiaccio e 0,25 mL del campione di saliva è stato trasferito in un’altra microprovetta sterile (1,5 mL PP, Sarstedt, Germania) che conteneva 0,5 mL di mezzo di congelamento. Entrambe le provette sono state conservate a -80°C fino all’analisi.
L’abbondanza di lattobacilli è stata valutata mediante conteggio in piastra. I campioni sono stati diluiti e sparsi su piastre di agar Rogosa (Oxoid, Inghilterra) e le piastre sono state incubate a 37°C per 72 ore in condizioni anaerobiche (2,5 L, AnaeroGen™, Oxoid). Due colonie da ogni piastra sono state prelevate a caso e ricoltivate. Gli isolati sono stati congelati e conservati in mezzi di congelamento a -80°C.
2.7. Identificazione di L. plantarum 299v
Per l’estrazione del DNA di ogni isolato i campioni sono stati scongelati e vortexati poco prima di aggiungere 1 mL di acqua MilliQ sterile e centrifugare alla massima velocità (14 800 g, 1 min). Il surnatante è stato rimosso e sono stati aggiunti altri 0,25 mL di acqua MilliQ sterile. L’estratto cellulare rimanente è stato macinato con perle di vetro sterili Assistent® (Ø 2 mm, Glaswarenfabrik Karl Hecht, Germania) in un agitatore (6°C, 30 min) e tutti i campioni sono stati poi utilizzati in una reazione di amplificazione casuale del DNA polimorfico (RAPD), per studiare la presenza di L. plantarum 299v. È stato preparato il mastermix per 35 campioni comprendente 175 μL di buffer (Qiagen, Germania), 35 μL di dNTP (Roche Diagnostics, Germania), 35 μL di Primer 73 (Qiagen, Germania) e 8,75 μL di Taq-Polimerasi (Qiagen, Germania). 7,25 μL di mastermix sono stati aggiunti a ciascuna provetta PCR (Gene Amp 0,5 mL, Applied Biosystems, Singapore) insieme a 42,75 μL di H2O e 1 μL del surnatante dei campioni.
La reazione RAPD è stata eseguita in una macchina PCR (Perkin Elmer, DNA Thermal Cycler, USA) secondo Quednau et al. I gel per l’elettroforesi sono stati preparati aggiungendo 0,75 g di Agarosio DNA Grade Electran® (VWR, Belgio) in 50 mL di tampone TB; la soluzione è stata poi riscaldata fino all’ebollizione e versata in vasche di gel per raffreddare. I gel sono stati infine messi in vassoi di gel con tampone TB. 2-5 μL di ogni campione sono stati aggiunti in ogni pozzetto insieme a 3 μL di tampone di carico prima di eseguire l’elettroforesi (100 V, 1 h). Gel Redx3 (Biotium Inc., USA), 1 mL in 99 mL dH2O, è stato usato per 20 min per colorare i gel e le foto sono state scattate secondo Quednau et al.
2.8. Calcoli statistici
I dati sono stati valutati statisticamente usando un Kruskal-Wallis One-Way Analysis of Variance (ANOVA) su Ranks o un Mann-Whitney Ranks Sum test quando appropriato. Un -test è stato utilizzato per il confronto a coppie delle concentrazioni assolute di IgA e dei livelli assoluti di cortisolo. Gli strumenti statistici sono stati Sigma Plot (11.0 e 12.0) e Excel 2013. Inoltre, è stato eseguito un test di incidenza relativo alla presenza di L. plantarum 299v con il test Fisher Exact, utilizzando QuickStat (2.6). I dati sono stati presentati come mediana e intervallo interquartile, così come media e deviazione standard. I valori minimi e massimi per i campioni di cortisolo sono stati eliminati per eliminare l’impatto dei valori anomali, dato che una chiara deviazione poteva essere vista nei dati. Questo riguardava solo i campioni di cortisolo. I valori appartenenti ai partecipanti che non soddisfacevano tutti i requisiti dello studio sono stati controllati e non sono risultati devianti. I loro risultati sono stati quindi inclusi.
2.9. Autorizzazione etica
Lo studio è stato approvato dal Regional Ethical Review Board di Lund (Ref 2013/166) e le considerazioni etiche hanno incluso i benefici e i rischi con il prodotto utilizzato e la possibilità di relazioni personali già esistenti tra il personale responsabile del test e i soggetti che hanno condotto lo studio.
3. Risultati
3.1. Valutazione della valutazione psicologica
La valutazione psicologica non ha mostrato alcuna differenza significativa di stress percepito tra i gruppi, e non c’era inoltre alcuna differenza significativa all’interno di ciascun gruppo quando si confrontavano i diversi giorni di campionamento.
3.2. Livelli di cortisolo nella saliva
I livelli assoluti di cortisolo (nM) nel giorno di riferimento (giorno 0) erano 9,18 (±2,50) per il gruppo placebo e 9,47 (±2,96) per il gruppo test, senza alcuna differenza significativa tra i due gruppi (). Quando il cambiamento relativo dei livelli mediani di cortisolo è stato confrontato con un valore di riferimento al giorno 0 (basale), è stata trovata una differenza significativa tra i gruppi al giorno 10 (Figura 1). Nessuna significatività è stata trovata all’interno dei gruppi.
3.3. Concentrazioni di IgA nella saliva
I livelli assoluti di IgA (mg/100 mL) nella saliva delle ghiandole minori il giorno di riferimento (giorno 0) erano 1,99 (±3,76) per il gruppo placebo e 4,80 (±9,17) per il gruppo test, senza alcuna differenza significativa tra i due gruppi (). I livelli assoluti di IgA (% IgA/proteina totale) nella saliva intera al giorno di riferimento (giorno 0) erano 25,3 (±7,37) per il gruppo placebo e 27,1 (±12,2) per il gruppo test, senza differenze significative tra i due gruppi (). In contrasto con il cambiamento dei livelli di cortisolo, le concentrazioni salivari mediane IgA in saliva intera o saliva dalle ghiandole minori non sono stati influenzati dal consumo di probiotico; cioè, nessuna differenza significativa è stata mostrata tra il gruppo probiotico e il gruppo placebo (figure 2 e 3, rispettivamente.).
3.4. Conta vitale dei lattobacilli e identificazione di L. plantarum 299v
Il giorno 14 c’era un aumento significativo nell’abbondanza di lattobacilli nella saliva dei soggetti del test che consumano probiotici rispetto a quelli dato il prodotto placebo (). L’aumento è stato anche significativo () all’interno del gruppo probiotico quando si confronta la linea di base con il giorno di campionamento finale (, Figura 4). L’incidenza di isolati identificati come L. plantarum 299v era significativamente aumentata il giorno 14 nelle persone con livelli rilevabili di lattobacilli, sia rispetto al gruppo placebo che alla linea di base ().
4. Discussione
La maggior parte dei partecipanti ha avuto il suo esame prima della fine dello studio, con un apparente, ma non significativo (), picco di stress percepito il giorno 10 per il gruppo placebo. Questo coincide con il picco nella concentrazione di cortisolo salivare nel gruppo placebo il giorno 10 (Figura 1). Al contrario, nessun picco è stato visto nel gruppo probiotico, suggerendo che il consumo di probiotici ha avuto un effetto sullo stress visto come la secrezione di cortisolo dalle surrenali. Il giorno 14, molti dei volontari avevano finito i loro esami e ci si poteva quindi aspettare una diminuzione del cortisolo, dal momento che il cortisolo risponde in modo relativamente rapido ai fattori di stress acuti.
Lo stress accademico, qui sotto forma di un periodo di esami, non può essere considerato uno stress cronico, dal momento che i partecipanti possono vedere una fine del periodo stressante. Si suggerisce quindi che lo stress accademico è più simile allo stress acuto per quanto riguarda la risposta allo stress. I livelli di cortisolo del presente studio erano nella stessa gamma di quelli precedentemente riportati per lo stress acuto.
Lo stress cronico è legato a un aumento sostenuto della secrezione di cortisolo. Si discute recentemente se sia l’effettivo aumento dei livelli di cortisolo o piuttosto come i tessuti bersaglio rispondono all’aumento dei livelli che è la causa di molte malattie e sintomi associati allo stress cronico. Ciò che è noto è che un aumento prolungato dei livelli di glucosio nel sangue può portare a spreco muscolare, accumulo e ridistribuzione del grasso e possibile diabete. Quindi, un possibile obiettivo per i probiotici potrebbe essere individui cronicamente stressati, dove i livelli elevati sostenuti di cortisolo aumentano il loro rischio di sviluppare malattie legate allo stress cronico.
Ci sono generalmente grandi differenze individuali nei livelli misurati di IgA salivari, che confonde i tentativi di vedere le differenze tra piccoli gruppi di individui. Tuttavia, i valori mediani nei diversi gruppi corrispondono bene a quelli riportati da altri. I presenti risultati dai campioni di saliva intera hanno mostrato che i valori tra il gruppo placebo e il gruppo test non differivano significativamente l’uno dall’altro e che i valori mediani in entrambi i gruppi erano simili. Guardando il cambiamento relativo in ogni gruppo, il valore mediano era leggermente positivo per il gruppo probiotico, mentre era leggermente negativo nel gruppo placebo. Confrontando con il 25° e il 75° percentile, si osserva un aumento della maggior parte dei livelli di IgA salivari rilevati nel gruppo placebo, il che rende difficile trarre qualsiasi conclusione (Figura 2). Stressors causando stress cronico sono stati collegati a livelli diminuiti di IgA salivari, mentre lo stress acuto ha dimostrato di aumentare i livelli, che indica un’attivazione della risposta immunitaria. Si potrebbe quindi suggerire che il fattore di stress in questo studio è più probabile che sia acuto che cronico.
Studi precedenti hanno mostrato una tendenza che suggerisce che i probiotici possono aumentare i livelli di IgA salivari durante lo stress. Tuttavia, le persone in esame nel presente studio hanno assunto probiotici solo per un periodo di due settimane, e anche se in questo gruppo c’era un livello significativamente più alto di lattobacilli, potrebbe essere che il periodo di studio era troppo breve per vedere chiari cambiamenti a livello individuale. A causa delle grandi differenze individuali nei livelli di IgA salivari, un maggior numero di partecipanti in ogni gruppo sarebbe stato anche auspicabile.
I livelli di IgA salivari nella saliva delle ghiandole minori è trovato per essere superiore a quello riportato da altri, che potrebbe essere dovuto a differenze individuali o a causa del disegno di studio di questo lavoro. Per esempio, un certo livello di stress e tipo di stress è stato applicato ai partecipanti, che non è stato applicato nello studio fatto da Sonesson et al. I dati della saliva delle ghiandole minori hanno mostrato che i valori mediani erano più alti nel gruppo test che nel gruppo placebo, ma la differenza tra i gruppi non era significativa. L’aumento sembra essere maggiore nel gruppo a cui sono stati somministrati i probiotici rispetto al gruppo placebo, ma la variazione relativa del valore mediano è approssimativamente la stessa nei due gruppi. Tuttavia, le barre di errore indicano grandi variazioni all’interno del gruppo a cui sono stati somministrati i probiotici, il che potrebbe spiegare la contraddizione (Figura 3).
Lo stress naturalistico di breve durata, compreso lo stress accademico, dovrebbe essere a metà strada tra lo stress acuto e quello cronico per quanto riguarda l’aumento o la diminuzione dei marcatori di stress. Poiché il fattore di stress è difficile da definire per quanto riguarda il tipo di stress applicato e poiché lo stress individuale applicato a ciascun partecipante potrebbe essere stato diverso, le differenze insignificanti trovate sono in linea con la teoria di come le IgA possano riflettere lo stress. Sarebbe stato più facile osservare i cambiamenti nelle IgA salivari se il periodo di studio fosse stato più lungo, o se fossero stati raccolti ulteriori campioni una o due settimane dopo lo studio, dato che i livelli di IgA sono stati visti diminuire anche qualche tempo dopo lo stress sperimentato in altri studi. Un’altra spiegazione potrebbe essere che, anche se ai partecipanti è stato detto di scrivere qualsiasi cambiamento nel loro stato di salute (ad esempio, incidenti con il raffreddore), questo non è stato controllato, né confrontato con outlier nei dati delle IgA salivari. Raffreddori e altre infezioni respiratorie causerebbero probabilmente un aumento delle IgA salivari, poiché le IgA fanno parte della prima linea di difesa del sistema immunitario contro gli agenti patogeni.
C’è stato un aumento significativo dei livelli di lattobacilli per il gruppo probiotico, anche in confronto al gruppo placebo, dimostrando che i batteri somministrati potrebbero sopravvivere nella cavità orale (Figura 4). Questo è stato anche supportato dal risultato della tipizzazione RAPD, che indica la presenza di L. plantarum 299v nei campioni in cui i livelli di lattobacilli erano superiori al limite di rilevazione. Quindi, sembra esserci un legame tra una maggiore presenza di batteri probiotici e la diminuzione dei livelli di cortisolo nella saliva.
5. Conclusioni
C’è una differenza significativa nella risposta di secrezione di cortisolo tra le persone di prova dato probiotici o placebo, probabilmente in relazione allo stress. Un aumento significativo è stato inoltre visto nei livelli di lattobacilli per il gruppo probiotico rispetto al gruppo placebo. Al contrario, nessuna significatività è stata trovata per le IgA salivari.
Interessi concorrenti
Irini Lazou Ahrén è una dipendente della Probi AB. Il prodotto e le capsule placebo sono stati forniti da Probi AB. Nessun altro interesse concorrente deve essere riportato.
Contributi degli autori
I due primi autori, Hannah Andersson e Cecilia Tullberg, hanno contribuito equamente a questo articolo e la prima paternità è condivisa.
Riconoscimenti
Gli autori ringraziano Jie Xu e Marie Kala, Lund University, per l’aiuto in laboratorio.