Abstract
L’esistenza di cellule staminali nel liquido amniotico umano è stata riportata per la prima volta quasi dieci anni fa. Da questa scoperta, la conoscenza di queste cellule è aumentata notevolmente. Oggi, le cellule staminali del liquido amniotico (AFS) sono ampiamente accettate come un nuovo potente strumento per la ricerca di base, nonché per la creazione di nuovi concetti di terapia basati sulle cellule staminali. È possibile generare linee cellulari AFS monoclonali genomicamente stabili con un alto potenziale proliferativo senza sollevare questioni etiche. Molti gruppi diversi hanno dimostrato che le cellule AFS possono essere differenziate in tutti e tre i lignaggi dello strato germinale, il che è rilevante sia per l’uso scientifico che terapeutico di queste cellule. Di particolare importanza per quest’ultimo è il fatto che le cellule AFS sono meno tumorali di altri tipi di cellule staminali pluripotenti. In questo articolo, abbiamo riassunto le conoscenze attuali su questo campo scientifico relativamente giovane. Inoltre, discutiamo le prospettive future di questa promettente area di ricerca sulle cellule staminali, concentrandoci sulle prossime importanti domande a cui è necessario rispondere. Introduzione
Anche se le cellule del liquido amniotico umano sono ampiamente utilizzate nella diagnosi prenatale di routine, la conoscenza di queste cellule rimane limitata. Tuttavia, la nozione che cellule indifferenziate e differenziate di varia origine e lignaggio sono presenti nel liquido amniotico è stata sostenuta da diversi rapporti negli ultimi tre decenni. Questo non è sorprendente, considerando che cellule appartenenti all’epitelio amniotico, alla pelle fetale e ai sistemi urogenitale, respiratorio e gastrointestinale del feto sono state rilevate nel liquido amniotico. Durante la gestazione prolungata, le secrezioni fetali respiratorie, urinarie e intestinali possono essere trovate nel liquido amniotico. Inoltre, è anche noto che la composizione, la morfologia e le proprietà di crescita dei campioni di cellule del liquido amniotico sono influenzate da alcune patologie fetali, come ad esempio i difetti del tubo neurale o la gastroschisi. Nel 2001, è stato suggerito che le cellule del liquido amniotico potrebbero essere utilizzate in approcci di ingegneria dei tessuti per la riparazione chirurgica di anomalie congenite nel periodo perinatale. Gli autori hanno isolato meccanicamente una sottopopolazione di cellule dal liquido amniotico di pecore incinte con una morfologia distinta. Il profilo immunocitochimico di queste cellule era molto simile a quello delle cellule di un lignaggio mesenchimale, fibroblasto/miofibroblasto. Mostrando una proliferazione significativamente più veloce di cellule fetali e adulte comparabili, queste cellule derivate dal liquido amniotico potevano essere coltivate su impalcature di polimeri di acido poliglicolico fino a strati cellulari confluenti. Inizialmente è stato discusso che un tale costrutto ingegnerizzato sarebbe ottimale per funzionare come un innesto per l’impianto sia nel periodo neonatale o anche prima della nascita. Questo potrebbe essere di particolare interesse per i bambini nati con un difetto della parete del corpo, che sono troppo giovani per un innesto da prendere da un’altra parte del loro corpo per la chirurgia ricostruttiva. I risultati ottenuti nei modelli animali sono davvero incoraggianti. Tuttavia, per quanto ne sappiamo, non siamo a conoscenza di un rapporto che descriva l’uso clinico di tale approccio terapeutico basato sulle cellule negli esseri umani fino ad ora.
Un’altra scoperta sulle cellule del liquido amniotico ha dato inizio ad un campo di ricerca molto promettente e in rapida crescita. Quasi dieci anni fa, è stato pubblicato il primo suggerimento del liquido amniotico umano come nuova fonte putativa di cellule staminali. La prima prova dell’esistenza di cellule AFS è stata dimostrata dalla scoperta di un tipo di cellule altamente proliferative nel liquido amniotico umano che esprimono il marcatore di cellule staminali pluripotenti Oct4. Oltre al fatto che queste cellule esprimono marcatori noti per essere specifici per le cellule staminali pluripotenti, è stato dimostrato che esprimono proteine del ciclo cellulare note per essere specifiche per le cellule in bicicletta. Dopo questa prima descrizione, molti gruppi hanno confermato l’esistenza di queste cellule Oct4+/c-Kit+ AFS e hanno segnalato il loro potenziale di differenziazione in ematopoietico, neurogenico, osteogenico, condrogenico, adipogenico, renale, epatico, e vari altri lineages. Anche se, per quanto riguarda le loro proprietà biologiche e il modello di espressione dei marcatori, le cellule AFS sembrano essere più simili alle cellule staminali embrionali (ES) che, per esempio, alle cellule del trofoblasto, l’origine precisa delle cellule AFS rimane sfuggente. Indagini biochimiche, immunocitochimiche, biologiche e morfologiche hanno rivelato che le cellule AFS rappresentano una nuova e specifica entità, essendo distinte dalle cellule ES o da altri tipi di cellule staminali, come quelle che possono essere isolate da fonti epiteliali amniotiche o trofoblastiche. Oggi è di grande interesse chiarire due questioni rilevanti riguardo alle cellule AFS. Da dove vengono? Hanno una funzione biologica in vivo? Abbiamo già discusso in precedenza che le cellule AFS potrebbero probabilmente svolgere un ruolo nei processi di guarigione delle ferite intrauterine. Tuttavia, finora non esiste un supporto sperimentale per questa ipotesi. È ovvio che le impostazioni sperimentali che permettono di provare questa ipotesi non sono davvero facili da immaginare o pratiche in questo momento (o ancora da sviluppare).
Dalla loro prima scoperta, è stato della massima importanza chiarire la questione se le cellule AFS hanno davvero un potenziale di differenziazione pluripotente, iniziando con successo la differenziazione in diversi lignaggi partendo da una singola cellula staminale. È importante notare che molti rapporti diversi nella letteratura che affermano di descrivere la ricerca sulle cellule AFS non hanno nemmeno chiarito con che tipo di cellule stanno lavorando. Molto spesso, i ricercatori hanno semplicemente utilizzato una miscela di cellule provenienti da liquido amniotico ottenute attraverso specifiche procedure di coltivazione. Tuttavia, come accennato in precedenza, tali miscele di cellule derivate dal liquido amniotico contengono una grande varietà di tipi specifici di cellule indifferenziate e differenziate. Ogni volta che uno studio riporta un potenziale di differenziazione su specifici lignaggi cellulari, è della massima importanza chiarire prima quale tipo di cellule di partenza è stato utilizzato (attraverso una dettagliata caratterizzazione biologica e immunocitochimica). Inoltre, la prova che le cellule AFS possiedono realmente un potenziale di differenziazione pluripotente può essere ottenuta solo partendo da una singola cellula caratterizzata per essere una cellula staminale. In ogni altro caso, si potrebbe supporre che una miscela di cellule di liquido amniotico, che è stata utilizzata come materiale di partenza, molto probabilmente conteneva un tipo di cellula con il potenziale di differenziazione in un lineage specifico e altri tipi di cellule con altri potenziali di differenziazione. Oppure il protocollo di differenziazione in vitro utilizzato in alcuni studi ha indotto una selezione (attraverso un vantaggio di crescita) per un tipo di cellule già differenziate (incluse) piuttosto che la differenziazione in buona fede. Gli approcci a singola cellula sono obbligatori e pratici dopo gli esperimenti di diluizione minima.
Il primo gruppo di ricerca, che teneva veramente conto di questo, ha riportato che discendendo da una singola cellula AFS Oct4-positiva, era possibile indurre il differenziamento adipogenico, osteogenico e neurogenico . Gli autori hanno utilizzato un protocollo di coltura in due fasi seguito da una dettagliata caratterizzazione immunocitochimica del tipo di cellule staminali ottenute. Tre anni dopo, un altro gruppo di ricerca ha isolato cellule AFS monoclonali tramite selezione citometrica a flusso e diluizione minima, che esprimevano i marcatori delle cellule staminali c-Kit e Oct4. Gli autori hanno descritto la prima creazione di linee cellulari AFS monoclonali, dotate di un alto potenziale proliferativo, che potevano essere coltivate per molti periodi ciclici con uno stato cromosomico stabile. L’utilizzo di tali linee cellulari AFS ha permesso loro di dimostrare che la differenziazione cellulare adipogenica, osteogenica, miogenica, endoteliale, neurogenica ed epatica poteva essere indotta. Importante, questi autori hanno anche riferito che le cellule AFS, a differenza delle cellule ES, non inducono la formazione di tumori nei topi immunodeficienti combinati gravi (SCID) (per una discussione dettagliata di questo aspetto vedi sotto).
Le cellule AFS, quando coltivate in assenza di fattori di differenziazione, possono spontaneamente formare aggregati multicellulari tridimensionali chiamati corpi embrionali. In passato, i corpi embrionali sono stati ampiamente considerati come un punto di partenza ottimale per la differenziazione delle cellule staminali in vari lignaggi. Di conseguenza, la formazione di corpi embrionali seguita da diversi approcci che inducono la differenziazione è vista come un modo appropriato per dimostrare il potenziale di differenziazione pluripotente di uno specifico tipo di cellule staminali. Di conseguenza, era interessante verificare se, a partire da una singola cellula, le cellule AFS sono in grado di formare corpi embrionali. In effetti, le cellule AFS umane monoclonali possono formare corpi embrionali, quando coltivate senza fattori antidifferenziazione in condizioni in cui non sono in grado di attaccarsi alla superficie dei piatti di coltura e senza contatto con le cellule nutrici. La formazione di questi aggregati multicellulari tridimensionali è accompagnata da una diminuzione dell’espressione dei marcatori delle cellule staminali e dall’induzione del differenziamento in diversi lignaggi. Questo studio che dimostra il potenziale di formare corpi embrionali è stata la prova definitiva che le cellule AFS sono pluripotenti. Inoltre, permette ora la ricapitolazione e lo studio delle strutture tridimensionali e dei contesti a livello di tessuto di molti fenomeni di differenziazione durante la prima embriogenesi dei mammiferi. Questi risultati sulla pluripotenza delle cellule AFS sono stati ottenuti utilizzando linee cellulari monoclonali generate attraverso la selezione cellulare magnetica e approcci di diluizione minima da campioni di amniocentesi umana. Oggi, esistono diverse linee monoclonali stabilite, che possono essere espanse come cellule staminali immature con un alto tasso di proliferazione in coltura senza la necessità di cellule feeder.
Insieme, lo stato attuale delle conoscenze è che le cellule AFS hanno il potenziale di differenziarsi in tipi di cellule dei tre strati germinali (ectoderma, mesoderma ed endoderma) e possono formare corpi embrionali, noti come il passo principale nella differenziazione delle cellule staminali pluripotenti. Rispetto ad altri tipi di cellule staminali, come le cellule staminali adulte, le cellule ES o le cellule staminali pluripotenti indotte (iPS), le cellule AFS presentano vantaggi specifici. Le cellule staminali adulte sono spesso difficili da campionare, mostrano un potenziale di differenziazione inferiore rispetto alle cellule AFS e non possono essere coltivate con un’elevata attività proliferativa. La generazione di linee di cellule ES attraverso la distruzione di un embrione umano solleva una serie di questioni etiche, che sono discusse in modo diverso da paese a paese. Inoltre, le cellule ES sono tumorigeniche, mentre le cellule AFS, come già menzionato sopra, non inducono la formazione di tumori in topi immunodeficienti combinati gravi. Rispetto alle cellule iPS, non è necessaria l’induzione ectopica della pluripotenza nelle cellule AFS. Le cellule AFS sono genomicamente stabili e non ospitano né la memoria epigenetica né le mutazioni somatiche delle cellule di origine già differenziate. Inoltre è stato riportato che le cellule iPS accumulano anomalie cariotipiche e mutazioni genetiche durante la propagazione in coltura. Recentemente, è stato riportato che durante l’induzione ectopica della pluripotenza le cellule iPS ricapitolano solo parzialmente il loro modello epigenetico. Questa importante scoperta deve essere presa in considerazione quando queste cellule sono pianificate per essere utilizzate per indagini dettagliate sui processi di differenziazione, così come quando sono considerate per nuovi approcci terapeutici putativi. Le cellule AFS mostrano già proprietà di cellule staminali e non hanno bisogno di induzione ectopica della pluripotenza. Inoltre, le cellule AFS mostrano già il modello epigenetico delle cellule staminali. In sintesi, non è sorprendente che molti tentativi si stiano attualmente concentrando sulla questione in quali condizioni le cellule AFS potrebbero essere utilizzate per terapie basate sulle cellule staminali. Inoltre, le cellule AFS stanno diventando sempre più accettate come uno strumento ottimale per la ricerca di base.
Sebbene le cellule ES, le cellule iPS e le cellule AFS siano considerate come portatrici di un potenziale di differenziazione pluripotente, la questione se esse esibiscano lo stesso spettro qualitativo di potenziale di differenziazione rimane senza risposta. Le cellule staminali pluripotenti sono definite come cellule auto-replicanti (le cellule possono dividersi di per sé) note per avere la capacità di svilupparsi in cellule e tessuti degli strati germinali primari, ectoderma, mesoderma ed endoderma. Questi tre tipi di cellule staminali (cellule ES, iPS e AFS) hanno dimostrato di possedere il potenziale per differenziarsi in cellule dei tre strati germinali. Tutte e tre possono anche formare corpi embrionali. Tuttavia, se hanno davvero un potenziale comparabile per differenziarsi in un tipo di cellula specifica con tutte le sue funzioni biologiche conosciute, deve essere verificato caso per caso. Infatti, crediamo che sia necessario esaminare e confrontare direttamente i loro potenziali di differenziazione e selezionare i tipi di cellule più adatti per progetti di scienza di base e per l’uso putativo in nuove terapie basate su cellule staminali. Inoltre, una differenza evidente tra questi tre tipi di cellule staminali pluripotenti dovrebbe essere studiata più in dettaglio in futuro. Fin dalla prima descrizione della loro coltivazione in vitro, le cellule ES sono note per essere tumorigeniche. Allo stesso modo, le cellule iPS inducono la formazione di tumori, quando sono trapiantate per via sottocutanea in topi nudi. Tuttavia, le cellule AFS sono state segnalate per non formare tumori in topi immunodeficienti combinati gravi. Poiché quest’ultimo è stato finora studiato solo in un progetto che analizzava un insieme specifico di trapianti su animali, sono necessarie ulteriori indagini per chiarire se le cellule AFS sono davvero non tumorigeniche. Ovviamente, se fosse vero, questo sarebbe un vantaggio importante rispetto alle cellule ES e iPS, almeno per quanto riguarda un putativo utilizzo clinico.
2. Cellule AFS per la terapia: Prospettive future
Molto dell’entusiasmo che circonda le cellule staminali umane è legato alla speranza dei clinici e dei pazienti che queste cellule possano una volta essere usate per terapie cellulari per un ampio spettro di malattie umane. Qui bisogna dire chiaramente che il lavoro sulle terapie basate sulle cellule AFS è ancora agli inizi. Molte questioni sono attualmente oggetto di studio, e finora nessun approccio terapeutico basato sulle cellule AFS ha raggiunto il livello di applicazione clinica di routine. Tuttavia, una serie di nuovi risultati della ricerca forniscono una forte evidenza che le cellule AFS potrebbero effettivamente servire un potente strumento nella medicina rigenerativa.
Per esempio, le insufficienze renali acute e croniche sono disturbi con alti tassi di morbilità e mortalità. Il trapianto di rene rimane l’opzione di trattamento più efficace per la maggior parte dei pazienti con malattia renale allo stadio finale. Purtroppo, la carenza di organi compatibili è un fattore molto limitante. Le strategie di trattamento si basano anche sulla dialisi renale convenzionale, ma il tasso di mortalità dei pazienti che richiedono la dialisi cronica è alto. Di conseguenza, l’uso putativo delle cellule staminali nella riparazione delle lesioni renali è stato messo a fuoco. Diversi studi pubblicati di recente sulla differenziazione renale delle cellule AFS fanno pensare che queste cellule staminali potrebbero essere considerate come una nuova fonte promettente per le terapie cellulari di riparazione delle lesioni renali e giustificano ulteriori indagini in questa direzione. Utilizzando un test di riaggregazione del rene, abbiamo recentemente pubblicato che le cellule AFS possiedono il potenziale per differenziare su lignaggi nefrogenici e che questa capacità dipende dal bersaglio mammifero della via di segnalazione della rapamicina (mTOR) (vedi anche la discussione sotto). Altri hanno dimostrato che le cellule AFS umane possono integrarsi nei tessuti renali quando iniettate in reni embrionali murini isolati o che l’iniezione di cellule AFS nei reni danneggiati di topi con necrosi tubulare acuta legata alla rabdomiolisi può mediare un effetto protettivo. Anche se questi e altri dati rendono allettante l’ipotesi che le cellule AFS possano fornire approcci alternativi di successo per il trattamento, ad esempio, della necrosi tubulare acuta, molte altre domande devono trovare risposta prima che tali terapie basate sulle cellule possano essere considerate per applicazioni di routine negli esseri umani.
Per molte ragioni diverse la creazione di nuove terapie basate sulle cellule staminali per patologie del sistema nervoso centrale finora incurabili, come il morbo di Parkinson, lesioni del midollo spinale, sclerosi multipla o ictus, è anche di grande interesse. Le cellule staminali neurali, che sono state studiate per questo scopo, possono essere trovate nel sistema nervoso centrale adulto e nell’embrione in via di sviluppo, ma questi tessuti non sono facilmente disponibili e sollevano preoccupazioni etiche. Negli ultimi anni, diversi gruppi hanno riportato il potenziale di differenziazione neurogenica delle cellule AFS. Tuttavia, prima che i prossimi passi nella direzione dell’uso clinico degli approcci basati sulle cellule AFS possano essere considerati, deve essere fornita la prova che le AFS possono davvero formare neuroni maturi. Infatti, c’è ancora un dibattito in corso nella letteratura, discutendo se le cellule AFS sono davvero in grado di formare neuroni funzionali. Nel prossimo futuro, sarà molto importante scoprire quali tipi di cellule neurogeniche possono essere sviluppate dalle cellule AFS. La questione se le cellule AFS possono differenziarsi in neuroni maturi funzionali deve essere indagata analizzando la capacità di sparare potenziali d’azione sensibili alla tetrodotossina con la forma e la durata caratteristica o dimostrando la comunicazione sinaptica con la microscopia elettronica.
Qui, sarebbe possibile discutere alcuni altri esempi per approcci terapeutici putativi utilizzando le cellule AFS. A volte si sostiene che molte questioni di base riguardanti l’origine, la tumorigenicità, il potenziale di differenziazione, lo stato epigenetico o la stabilità genomica devono essere indagate prima che le cellule AFS possano essere considerate come uno strumento terapeutico. Tuttavia, crediamo che tutti questi aspetti debbano essere studiati in parallelo. Inoltre, per considerazioni future è davvero importante confrontare quantitativamente e qualitativamente tutte queste proprietà delle cellule AFS con quelle di altri tipi di cellule staminali pluripotenti o adulte.
3. Le cellule AFS nella scienza di base: Prospettive future
Le cellule staminali sono strumenti molto utili per studiare la regolazione molecolare e cellulare dei processi di differenziazione. Un approccio per conoscere meglio il ruolo, per esempio, di un gene specifico per un certo processo di differenziazione è quello di abbattere l’espressione endogena del gene di interesse. Tale approccio permette di chiarire il ruolo dell’espressione genica modulata per il potenziale della cellula di differenziarsi in una linea specifica. Abbiamo recentemente pubblicato un protocollo per un efficiente silenziamento genico prolungato mediato da siRNA nelle cellule AFS. Questo protocollo, che abbiamo già testato per una varietà di geni diversi, permette una downregulation del 96-98% dell’espressione genica endogena per un periodo di tempo di circa 14 giorni nelle cellule AFS e in una varietà di altre cellule primarie, immortalizzate o trasformate.
Più recentemente, abbiamo fatto uso di questo approccio per studiare il ruolo del percorso mTOR nelle cellule AFS umane. La deregolazione dei regolatori a monte di mTOR, come, per esempio, Wnt, Ras, TNF-α, PI3K, o Akt, è un segno distintivo in molti tumori umani. Mutazioni nei geni componenti il percorso mTOR TSC1, TSC2, LKB1, PTEN, VHL, NF1 e PKD1 innescano lo sviluppo delle sindromi genetiche umane: sclerosi tuberosa, la sindrome di Peutz-Jeghers, la sindrome di Cowden, la sindrome di Bannayan-Riley-Ruvalcaba, la malattia di Lhermitte-Duclos, la sindrome di Proteus, la malattia di von Hippel-Lindau, la neurofibromatosi di tipo 1 e la malattia policistica del rene. Oltre a una varietà di disordini a singolo gene e alla tumorigenesi, il percorso mTOR ha anche dimostrato di essere rilevante per lo sviluppo di malattie complesse, come l’ipertrofia cardiaca, l’obesità o il diabete di tipo 2. Tutte queste conseguenze patologiche dell’attività deregolata di mTOR sono spiegabili, considerando che mTOR è il componente chiave della cascata di segnalazione dell’insulina, che è coinvolta in una grande varietà di processi diversi come la crescita cellulare, la proliferazione, il metabolismo, la trascrizione, la traduzione, la sopravvivenza, l’autofagia, l’invecchiamento, il differenziamento e l’oncogenesi. Abbiamo scoperto che l’intero processo di formazione del corpo embrionale delle cellule AFS dipende da entrambi gli enzimi contenenti mTOR, mTORC1 e mTORC2. Come accennato in precedenza, la modulazione dei componenti mTOR tramite approcci specifici siRNA ha rivelato che il potenziale delle cellule AFS di contribuire alla formazione del tessuto renale è regolato da questa via di segnalazione. Più recentemente, l’approccio per abbattere le funzioni dei geni endogeni nelle cellule AFS ci ha permesso di rilevare che i due regolatori mTOR, tuberina e PRAS40, sono guardiani antiapoptotici durante la differenziazione delle cellule AFS umane. Nel complesso, crediamo fermamente che l’approccio del knockdown mediato da siRNA dell’espressione genica endogena nelle linee cellulari monoclonali umane AFS sia uno strumento molto potente per i progetti futuri che si occupano della regolazione molecolare della differenziazione. Un altro aspetto molto interessante per la futura ricerca di base è il deposito di linee cellulari AFS che portano mutazioni naturali, che sono di rilevanza per alcuni fenotipi patologici umani. Nella genetica medica il futuro sviluppo di nuove strategie profilattiche e terapeutiche dipende direttamente da una migliore comprensione dei meccanismi con cui la variazione genetica naturale contribuisce alla malattia. Nei paesi in cui è legale l’uso di embrioni umani per la ricerca, le linee di cellule ES portatrici di certi difetti ereditari sono generate da embrioni con tutti i tipi di anomalie cromosomiche numeriche o specifiche mutazioni di malattie monogeniche escluse dal trasferimento nell’utero dopo la diagnosi genetica preimpianto. Anche una varietà di linee iPS da disordini monogenici, sindromi cromosomiche e malattie complesse sono già state generate, con lo scopo di utilizzarle per progetti di ricerca di base. Tuttavia, come già discusso in dettaglio, sia le cellule ES che le cellule iPS presentano notevoli svantaggi rispetto alle cellule AFS. Oltre ad altri approcci invasivi, l’amniocentesi è una procedura standard ampiamente accettata per le cure prenatali dagli anni ’70. È quasi imprevedibile il numero di amniocentesi eseguite in tutto il mondo all’anno. Nel complesso, crediamo che la generazione e la banca di linee cellulari AFS umane normali e di linee cellulari AFS con aberrazioni cromosomiche, così come di linee cellulari AFS con specifiche mutazioni di malattie monogeniche potrebbe fornire strumenti molto potenti per la modellazione della malattia nella ricerca futura. Qui è importante notare che il banking di cellule AFS per scopi non di ricerca, con l’obiettivo di proteggere la salute di un bambino avendo a disposizione cellule staminali per tutta la sua vita, è un’altra cosa. Alcune aziende in Europa e negli Stati Uniti stanno già offrendo di bancare le cellule AFS, quando, per esempio, viene eseguita un’amniocentesi per la diagnosi prenatale. I loro argomenti per la conservazione delle cellule AFS sono che queste cellule una volta potrebbero aiutare a trattare le lesioni (ad esempio, riparare la cartilagine del ginocchio), guarire le ferite o sviluppare la pelle per innesti specifici. Come menzionato in precedenza, in futuro, è necessaria un’ampia ricerca per stabilire l’uso clinico putativo delle cellule staminali AFS negli esseri umani. I promettenti risultati ottenuti negli ultimi anni in questo campo scientifico ancora giovane giustificano chiaramente ulteriori indagini dettagliate nella direzione dell’applicazione clinica putativa delle cellule AFS. In questo articolo vorremmo sottolineare che il banking delle cellule AFS con mutazioni naturali per la ricerca genetica umana dovrebbe essere iniziato il più presto possibile in diversi laboratori sotto standard di qualità comparabili. Varrebbe la pena di incoraggiare diversi laboratori a campionare il liquido amniotico da amniocentesi con indicazioni comparabili da settimane simili di gravidanza. I protocolli per isolare le cellule staminali, eseguire diluizioni minime e caratterizzare le linee cellulari AFS monoclonali così ottenute dovrebbero essere standardizzati. Il biobanking delle linee cellulari AFS con mutazioni caratterizzate permetterebbe di saltare al prossimo passo della ricerca genetica umana utilizzando cellule staminali umane.