Abstract
L’existence de cellules souches dans le liquide amniotique humain a été signalée pour la première fois il y a près de dix ans. Depuis cette découverte, les connaissances sur ces cellules ont considérablement augmenté. Aujourd’hui, les cellules souches du liquide amniotique (AFS) sont largement acceptées comme un nouvel outil puissant pour la recherche fondamentale ainsi que pour l’établissement de nouveaux concepts de thérapie basés sur les cellules souches. Il est possible de générer des lignées de cellules AFS monoclonales stables sur le plan génomique et dotées d’un fort potentiel de prolifération sans soulever de problèmes éthiques. De nombreux groupes ont démontré que les cellules AFS peuvent être différenciées en trois lignées germinales, ce qui est important pour l’utilisation scientifique et thérapeutique de ces cellules. Le fait que les cellules AFS soient moins tumorigènes que d’autres types de cellules souches pluripotentes est particulièrement important pour cette dernière. Dans cet article, nous avons résumé les connaissances actuelles sur ce domaine scientifique relativement jeune. En outre, nous discutons des perspectives futures pertinentes de ce domaine prometteur de la recherche sur les cellules souches en nous concentrant sur les prochaines questions importantes, qui doivent être répondues.
1. Introduction
Bien que les cellules du liquide amniotique humain soient largement utilisées dans le diagnostic prénatal de routine, les connaissances sur ces cellules restent limitées. Cependant, l’idée que des cellules indifférenciées et différenciées d’origines et de lignées diverses sont présentes dans le liquide amniotique a été soutenue par plusieurs rapports au cours des trois dernières décennies. Cela n’est pas surprenant, étant donné que des cellules appartenant à l’épithélium amniotique, à la peau du fœtus et aux systèmes urogénital, respiratoire et gastro-intestinal du fœtus ont été détectées dans le liquide amniotique. Pendant une gestation prolongée, on peut trouver dans le liquide amniotique des sécrétions respiratoires, urinaires et intestinales du fœtus. En outre, il est également connu que la composition, la morphologie et les propriétés de croissance des échantillons de cellules du liquide amniotique sont affectées par certaines pathologies fœtales, comme par exemple les anomalies du tube neural ou la gastroschisis .
Un nouvel intérêt pour les cellules dérivées du liquide amniotique a été initié par deux découvertes indépendantes. En 2001, il a été suggéré que les cellules du liquide amniotique pourraient être utilisées dans des approches d’ingénierie tissulaire pour la réparation chirurgicale d’anomalies congénitales dans la période périnatale. Les auteurs ont isolé mécaniquement une sous-population de cellules du liquide amniotique de brebis gestantes présentant une morphologie distincte. Le profil immunocytochimique de ces cellules était très comparable à celui des cellules d’une lignée mésenchymateuse, fibroblaste/myofibroblaste. Présentant une prolifération nettement plus rapide que les cellules fœtales et adultes comparables, ces cellules dérivées du liquide amniotique ont pu être cultivées sur des échafaudages en polymère d’acide polyglycolique jusqu’à des couches cellulaires confluentes. À l’origine, il a été envisagé qu’une telle construction artificielle serait optimale pour servir de greffe à implanter pendant la période néonatale ou même avant la naissance. Cela pourrait être particulièrement intéressant pour les enfants nés avec une anomalie de la paroi corporelle, qui sont trop jeunes pour qu’une greffe puisse être prélevée ailleurs dans leur corps à des fins de chirurgie reconstructive. Les résultats obtenus dans les modèles animaux sont en effet encourageants. Cependant, à notre connaissance, aucun rapport ne décrit jusqu’à présent l’utilisation clinique d’une telle approche de thérapie cellulaire chez l’homme.
Une autre découverte sur les cellules du liquide amniotique a initié un domaine de recherche très prometteur et en pleine expansion. Il y a presque dix ans, la première suggestion du liquide amniotique humain comme nouvelle source putative de cellules souches a été publiée . La première preuve de l’existence des cellules AFS a été apportée par la découverte d’un type de cellules hautement prolifératives dans le liquide amniotique humain, exprimant le marqueur de cellules souches pluripotentes Oct4. Outre le fait que ces cellules expriment des marqueurs connus pour être spécifiques des cellules souches pluripotentes, il a été prouvé qu’elles expriment des protéines du cycle cellulaire connues pour être spécifiques des cellules cycliques. Après cette première description, de nombreux groupes ont confirmé l’existence de ces cellules AFS Oct4+/c-Kit+ et ont rapporté leur potentiel de différenciation en lignées hématopoïétiques, neurogéniques, ostéogéniques, chondrogéniques, adipogéniques, rénales, hépatiques et diverses autres lignées. Bien que, du point de vue de leurs propriétés biologiques et du profil d’expression des marqueurs, les cellules AFS semblent plus proches des cellules souches embryonnaires (ES) que, par exemple, des cellules trophoblastiques, l’origine précise des cellules AFS reste difficile à déterminer. Des études biochimiques, immunocytochimiques, biologiques et morphologiques ont révélé que les cellules AFS représentent une entité nouvelle et spécifique, distincte des cellules ES ou d’autres types de cellules souches, telles que celles qui peuvent être isolées à partir de sources épithéliales amniotiques ou trophoblastiques. Il est aujourd’hui très intéressant de clarifier deux questions pertinentes concernant les cellules AFS. D’où proviennent-elles ? Ont-elles une fonction biologique in vivo ? Nous avons déjà évoqué précédemment que les cellules AFS pourraient probablement jouer un rôle dans les processus de cicatrisation intra-utérine. Cependant, jusqu’à présent, il n’existe aucun support expérimental pour cette hypothèse. Il est évident que les paramètres expérimentaux permettant de prouver cette hypothèse ne sont pas vraiment faciles à imaginer ou pratiques à l’heure actuelle (ou doivent encore être développés).
Depuis leur première découverte, il était de la plus haute importance de clarifier la question de savoir si les cellules AFS possèdent réellement un potentiel de différenciation pluripotente en initiant avec succès la différenciation en différentes lignées à partir d’une seule cellule souche. Il est important de noter que de nombreux rapports dans la littérature qui prétendent décrire des recherches sur les cellules AFS ne précisent même pas avec quel type de cellules ils travaillent. Très souvent, les chercheurs ont simplement utilisé un mélange de cellules provenant du liquide amniotique obtenu par des procédures de culture spécifiques. Cependant, comme nous l’avons mentionné plus haut, ces mélanges de cellules issues du liquide amniotique contiennent une grande variété de types de cellules spécifiques indifférenciées et différenciées. Lorsqu’une étude rapporte un potentiel de différenciation sur des lignées cellulaires spécifiques, il est de la plus haute importance de clarifier d’abord quel type de cellule de départ a été utilisé (par une caractérisation biologique et immunocytochimique détaillée). En outre, la preuve que les cellules AFS possèdent réellement un potentiel de différenciation pluripotent ne peut être obtenue qu’à partir d’une seule cellule caractérisée comme étant une cellule souche. Dans tout autre cas, on pourrait supposer qu’un mélange de cellules du liquide amniotique, qui a été utilisé comme matériau de départ, contenait très probablement un type de cellule ayant le potentiel de se différencier en une lignée spécifique et d’autres types de cellules ayant d’autres potentiels de différenciation. Ou encore, le protocole de différenciation in vitro utilisé dans certaines études a induit une sélection (via un avantage de croissance) pour un type cellulaire déjà différencié (inclus) plutôt qu’une véritable différenciation. Les approches unicellulaires sont obligatoires et pratiques après les expériences de dilution minimale.
Le premier groupe de recherche, qui prenait vraiment cela en compte, a rapporté qu’en descendant d’une seule cellule AFS positive pour Oct4, il était possible d’induire une différenciation adipogène, ostéogène et neurogène . Les auteurs ont utilisé un protocole de culture en deux étapes, suivi d’une caractérisation immunocytochimique détaillée du type de cellule souche obtenu. Trois ans plus tard, un autre groupe de recherche a isolé des cellules AFS monoclonales par sélection cytométrique en flux et dilution minimale, qui exprimaient les marqueurs de cellules souches c-Kit et Oct4 . Les auteurs ont décrit le premier établissement de lignées cellulaires AFS monoclonales, dotées d’un potentiel prolifératif élevé, qui pouvaient être cultivées pendant de nombreuses périodes de cycle avec un statut chromosomique stable. L’utilisation de ces lignées cellulaires AFS leur a permis de démontrer que la différenciation des cellules adipogènes, ostéogènes, myogènes, endothéliales, neurogènes et hépatiques pouvait être induite. De manière importante, ces auteurs ont également signalé que les cellules AFS, contrairement aux cellules ES, n’induisent pas la formation de tumeurs chez les souris immunodéficientes combinées sévères (SCID) (pour une discussion détaillée de cet aspect, voir ci-dessous) .
Les cellules ES, lorsqu’elles sont cultivées en l’absence de facteurs de différenciation, peuvent spontanément former des agrégats multicellulaires tridimensionnels appelés corps embryoïdes. Dans le passé, les corps embryoïdes ont été largement considérés comme un point de départ optimal pour la différenciation des cellules souches en diverses lignées. En conséquence, la formation de corps embryoïdes suivie de différentes approches induisant la différenciation est considérée comme un moyen approprié de prouver le potentiel de différenciation pluripotente d’un type spécifique de cellules souches. Par conséquent, il était intéressant de tester si, à partir d’une seule cellule, les cellules AFS sont capables de former des corps embryoïdes. En effet, les cellules AFS humaines monoclonales peuvent former des corps embryoïdes, lorsqu’elles sont cultivées sans facteurs d’antidifférenciation dans des conditions où elles sont incapables de se fixer à la surface des boîtes de culture et sans contact avec des cellules nourricières. La formation de ces agrégats multicellulaires tridimensionnels s’accompagne d’une diminution de l’expression des marqueurs des cellules souches et de l’induction de la différenciation en différentes lignées. Cette étude démontrant le potentiel de formation de corps embryoïdes a été la preuve ultime de la pluripotence des cellules AFS. En outre, elle permet maintenant de récapituler et d’étudier les structures tridimensionnelles et les contextes tissulaires de nombreux phénomènes de différenciation au cours de l’embryogenèse précoce des mammifères. Ces résultats sur la pluripotence des cellules AFS ont été obtenus en utilisant des lignées cellulaires monoclonales générées par triage magnétique des cellules et par des approches de dilution minimale à partir d’échantillons d’amniocentèse humaine. Aujourd’hui, il existe de nombreuses lignées monoclonales établies, qui peuvent être développées en tant que cellules souches immatures avec un taux de prolifération élevé en culture, sans avoir besoin de cellules nourricières.
Dans l’ensemble, l’état actuel des connaissances est que les cellules AFS ont le potentiel de se différencier en types de cellules des trois couches germinales (ectoderme, mésoderme et endoderme) et peuvent former des corps embryoïdes, connus comme l’étape principale de la différenciation des cellules souches pluripotentes. Par rapport à d’autres types de cellules souches, comme les cellules souches adultes, les cellules ES ou les cellules souches pluripotentes induites (iPS), les cellules AFS présentent des avantages spécifiques. Les cellules souches adultes sont souvent difficiles à échantillonner, présentent un potentiel de différenciation plus faible que les cellules AFS et ne peuvent pas être cultivées avec une activité proliférative élevée. La génération de lignées de cellules ES par la destruction d’un embryon humain soulève une série de questions éthiques, qui sont discutées différemment selon les pays. En outre, les cellules ES sont tumorigènes, alors que les cellules AFS, comme nous l’avons déjà mentionné, n’induisent pas la formation de tumeurs chez les souris souffrant d’immunodéficience combinée sévère. Par rapport aux cellules iPS, l’induction ectopique de la pluripotence n’est pas nécessaire dans les cellules AFS. Les cellules AFS sont génomiquement stables et n’abritent ni la mémoire épigénétique ni les mutations somatiques des cellules sources déjà différenciées. En outre, il a été signalé que les cellules iPS accumulent des anomalies caryotypiques et des mutations génétiques au cours de leur propagation en culture. Récemment, il a été signalé que pendant l’induction ectopique de la pluripotence, les cellules iPS ne récapitulent qu’incomplètement leur modèle épigénétique. Cette découverte importante doit être prise en compte lorsqu’il est prévu d’utiliser ces cellules pour des études détaillées sur les processus de différenciation, ainsi que lorsqu’elles sont envisagées pour de nouvelles approches thérapeutiques potentielles. Les cellules AFS présentent déjà des propriétés de cellules souches et ne nécessitent pas d’induction ectopique de la pluripotence. En outre, les cellules AFS présentent déjà le schéma épigénétique des cellules souches. En résumé, il n’est pas surprenant que de nombreuses tentatives se concentrent actuellement sur la question de savoir dans quelles conditions les cellules AFS pourraient être utilisées pour des thérapies basées sur les cellules souches. En outre, les cellules AFS sont de plus en plus reconnues comme un outil optimal pour la recherche fondamentale.
Bien que les cellules ES, les cellules iPS et les cellules AFS soient considérées comme ayant un potentiel de différenciation pluripotente, la question de savoir si elles présentent le même spectre qualitatif de potentiel de différenciation reste sans réponse. Les cellules souches pluripotentes sont définies comme des cellules auto-réplicatives (les cellules peuvent se diviser par elles-mêmes) connues pour avoir la capacité de se développer en cellules et tissus des couches germinales primaires, l’ectoderme, le mésoderme et l’endoderme. Il a été démontré que ces trois types de cellules souches (cellules ES, iPS et AFS) ont le potentiel de se différencier en cellules des trois couches germinales. Tous trois peuvent également former des corps embryoïdes. Cependant, la question de savoir si elles ont réellement des potentiels comparables pour se différencier en un type de cellule spécifique avec toutes ses fonctions biologiques connues doit être testée au cas par cas. En fait, nous pensons qu’il est nécessaire d’examiner et de comparer directement leurs potentiels de différenciation et de sélectionner les types de cellules les plus appropriés pour les projets de science fondamentale et pour l’utilisation putative dans de nouvelles thérapies basées sur les cellules souches. En outre, une différence évidente entre ces trois types de cellules souches pluripotentes devrait être étudiée plus en détail à l’avenir. Depuis la première description de leur culture in vitro, les cellules ES sont connues pour être tumorigènes. De même, les cellules iPS induisent la formation de tumeurs lorsqu’elles sont transplantées par voie sous-cutanée chez des souris nude. Cependant, on a constaté que les cellules AFS ne formaient pas de tumeurs chez les souris souffrant d’immunodéficience combinée sévère. Étant donné que ce dernier point n’a été étudié jusqu’à présent que dans le cadre d’un projet analysant un ensemble spécifique de transplantations animales, des recherches supplémentaires sont nécessaires pour clarifier si les cellules AFS sont réellement non tumorigènes. Évidemment, si cela s’avère vrai, cela constituerait un avantage important par rapport aux cellules ES et iPS, du moins en ce qui concerne une utilisation clinique putative.
2. Cellules AFS pour la thérapie : Perspectives futures
Une grande partie de l’excitation entourant les cellules souches humaines est liée à l’espoir des cliniciens et des patients que ces cellules puissent un jour être utilisées pour des thérapies cellulaires pour un large spectre de maladies humaines. Il convient ici de préciser que les travaux sur les thérapies cellulaires AFS en sont encore à leurs débuts. De nombreuses questions sont actuellement à l’étude et, à ce jour, aucune approche thérapeutique basée sur les cellules AFS n’a atteint le niveau d’application clinique de routine. Cependant, une variété de nouveaux résultats de recherche fournissent des preuves solides que les cellules AFS pourraient en effet servir d’outil puissant en médecine régénérative.
Par exemple, les insuffisances rénales aiguës et chroniques sont des troubles avec des taux élevés de morbidité et de mortalité. La transplantation rénale reste l’option thérapeutique la plus efficace pour une majorité de patients atteints d’insuffisance rénale terminale. Malheureusement, la pénurie d’organes compatibles est un facteur très limitant. Les stratégies de traitement reposent également sur la dialyse rénale conventionnelle, mais le taux de mortalité des patients nécessitant une dialyse chronique est élevé. En conséquence, l’utilisation putative des cellules souches dans la réparation des lésions rénales a été mise en évidence. Plusieurs études récemment publiées sur la différenciation rénale des cellules AFS permettent de spéculer que ces cellules souches pourraient être considérées comme une nouvelle source prometteuse pour les thérapies cellulaires visant à réparer les lésions rénales et justifient des recherches plus approfondies dans cette direction. En utilisant un test de réagrégation rénale, nous avons récemment publié que les cellules AFS ont le potentiel de se différencier en lignées néphrogéniques et que cette capacité dépend de la voie de signalisation de la cible mammalienne de la rapamycine (mTOR) (voir également la discussion ci-dessous). D’autres chercheurs ont démontré que les cellules AFS humaines peuvent s’intégrer dans les tissus rénaux lorsqu’elles sont injectées dans des reins embryonnaires murins isolés ou que l’injection de cellules AFS dans les reins endommagés de souris souffrant de nécrose tubulaire aiguë liée à la rhabdomyolyse peut avoir un effet protecteur. Bien que ces données, ainsi que d’autres, rendent tentante l’hypothèse selon laquelle les cellules AFS pourraient constituer des approches alternatives efficaces pour le traitement, par exemple, de la nécrose tubulaire aiguë, de nombreuses autres questions doivent trouver une réponse avant que de telles thérapies cellulaires puissent être envisagées pour des applications de routine chez l’homme.
Pour de nombreuses raisons différentes, l’établissement de nouvelles thérapies à base de cellules souches pour des pathologies du système nerveux central jusqu’à présent incurables, telles que la maladie de Parkinson, les lésions de la moelle épinière, la sclérose en plaques ou les accidents vasculaires cérébraux, présente également un grand intérêt. Les cellules souches neurales, qui ont été étudiées à cette fin, peuvent être trouvées dans le système nerveux central adulte et dans l’embryon en développement, mais ces tissus ne sont pas facilement disponibles et posent des problèmes éthiques. Ces dernières années, différents groupes ont fait état du potentiel de différenciation neurogène des cellules AFS. Cependant, avant d’envisager les prochaines étapes vers l’utilisation clinique des approches basées sur les cellules AFS, la preuve que les AFS peuvent réellement former des neurones matures doit être apportée. En fait, un débat est toujours en cours dans la littérature pour savoir si les cellules AFS sont réellement capables de former des neurones fonctionnels. Dans un avenir proche, il sera très important de découvrir quels types de cellules neurogènes peuvent être développés à partir des cellules AFS. La question de savoir si les cellules AFS peuvent se différencier en neurones matures fonctionnels doit être étudiée en analysant la capacité à tirer des potentiels d’action sensibles à la tétrodotoxine avec la forme et la durée caractéristiques ou en démontrant la communication synaptique par microscopie électronique .
Il serait possible ici de discuter de quelques autres exemples d’approches thérapeutiques putatives utilisant les cellules AFS. Il est parfois avancé que de nombreuses questions fondamentales concernant l’origine, la tumorigénicité, le potentiel de différenciation, le statut épigénétique ou la stabilité génomique doivent être étudiées avant que les cellules AFS puissent être considérées comme un outil thérapeutique. Cependant, nous pensons que tous ces aspects doivent être étudiés en parallèle. En outre, pour des considérations futures, il est vraiment important de comparer quantitativement et qualitativement toutes ces propriétés des cellules AFS à celles d’autres types de cellules souches pluripotentes ou adultes.
3. Les cellules AFS dans la science fondamentale : Perspectives futures
Les cellules souches sont des outils très utiles pour étudier la régulation moléculaire et cellulaire des processus de différenciation. Une approche pour en savoir plus sur le rôle, par exemple, d’un gène spécifique pour un certain processus de différenciation est de supprimer l’expression endogène du gène d’intérêt. Une telle approche permet de clarifier le rôle de l’expression modulée du gène sur le potentiel de la cellule à se différencier en une lignée spécifique. Nous avons récemment publié un protocole pour une extinction prolongée efficace des gènes par le biais d’un siRNA dans les cellules AFS. Ce protocole, que nous avons déjà testé pour une variété de gènes différents, permet une dérégulation de 96-98% de l’expression du gène endogène sur une période d’environ 14 jours dans les cellules AFS et dans une variété d’autres cellules primaires, immortalisées ou transformées.
Plus récemment, nous avons utilisé cette approche pour étudier le rôle de la voie mTOR dans les cellules AFS humaines. La dérégulation des régulateurs en amont de mTOR, comme, par exemple, Wnt, Ras, TNF-α, PI3K ou Akt, est une caractéristique de nombreux cancers humains. Des mutations dans les gènes TSC1, TSC2, LKB1, PTEN, VHL, NF1 et PKD1, composants de la voie mTOR, déclenchent le développement de syndromes génétiques humains : la sclérose tubéreuse, le syndrome de Peutz-Jeghers, le syndrome de Cowden, le syndrome de Bannayan-Riley-Ruvalcaba, la maladie de Lhermitte-Duclos, le syndrome de Proteus, la maladie de von Hippel-Lindau, la neurofibromatose de type 1 et la polykystose rénale. En plus d’une variété de troubles monogéniques et de la tumorigenèse, la voie mTOR s’est également avérée pertinente pour le développement de maladies complexes, telles que l’hypertrophie cardiaque, l’obésité ou le diabète de type 2. Toutes ces conséquences pathologiques de la dérégulation de l’activité de mTOR sont explicables, étant donné que mTOR est le composant clé de la cascade de signalisation de l’insuline, qui est impliquée dans une grande variété de processus différents tels que la croissance cellulaire, la prolifération, le métabolisme, la transcription, la traduction, la survie, l’autophagie, le vieillissement, la différenciation et l’oncogenèse . Nous avons constaté que l’ensemble du processus de formation du corps embryonnaire des cellules AFS dépend des deux enzymes contenant mTOR, mTORC1 et mTORC2. Comme nous l’avons mentionné ci-dessus, la modulation des composants de mTOR par des approches spécifiques de siRNA a révélé que le potentiel des cellules AFS à contribuer à la formation du tissu rénal est régulé par cette voie de signalisation. Plus récemment, l’approche consistant à neutraliser les fonctions des gènes endogènes dans les cellules AFS nous a permis de détecter que les deux régulateurs mTOR, tubérine et PRAS40, sont des gardiens antiapoptotiques au cours de la différenciation précoce des cellules AFS humaines. Dans l’ensemble, nous croyons fermement que l’approche de l’élimination par siRNA de l’expression des gènes endogènes dans les lignées cellulaires AFS monoclonales humaines est un outil très puissant pour les projets futurs traitant de la régulation moléculaire de la différenciation.
Un autre aspect très intéressant pour la recherche fondamentale future est la mise en banque de lignées cellulaires AFS portant des mutations naturelles, qui sont pertinentes pour certains phénotypes pathologiques humains. En génétique médicale, le développement futur de nouvelles stratégies prophylactiques et thérapeutiques dépend directement d’une meilleure compréhension des mécanismes par lesquels les variations génétiques naturelles contribuent à la maladie. Dans les pays où l’utilisation d’embryons humains à des fins de recherche est légale, des lignées de cellules ES porteuses de certains défauts héréditaires sont générées à partir d’embryons présentant toutes sortes d’anomalies chromosomiques numériques ou de mutations spécifiques de maladies monogéniques exclues du transfert dans l’utérus après un diagnostic génétique préimplantatoire. De même, une variété de lignées iPS provenant de troubles monogéniques, de syndromes chromosomiques et de maladies complexes ont déjà été générées, dans le but de les utiliser pour des projets de recherche fondamentale. Cependant, comme nous l’avons déjà expliqué en détail, les cellules ES et les cellules iPS présentent des inconvénients importants par rapport aux cellules AFS. Outre d’autres approches invasives, l’amniocentèse est une procédure standard largement acceptée dans le cadre des soins prénataux depuis les années 1970. Le nombre d’amniocentèses réalisées chaque année dans le monde est presque imprévisible. Dans l’ensemble, nous pensons que la génération et la mise en banque de lignées cellulaires AFS humaines normales et de lignées cellulaires AFS présentant des aberrations chromosomiques, ainsi que de lignées cellulaires AFS présentant des mutations spécifiques de maladies monogéniques, pourraient fournir des outils très puissants pour la modélisation de la maladie dans les recherches futures. Il est important de noter ici que la mise en banque de cellules AFS à des fins autres que la recherche, dans le but de protéger la santé d’un enfant en disposant de cellules souches tout au long de sa vie, est une chose différente. Certaines entreprises en Europe et aux Etats-Unis proposent déjà de mettre en banque des cellules AFS, lorsque, par exemple, une amniocentèse est réalisée pour un diagnostic prénatal. Leurs arguments en faveur de la préservation des cellules AFS sont que ces cellules pourraient un jour aider à soigner des blessures (par exemple, à réparer le cartilage du genou), à guérir des blessures ou à développer de la peau pour des greffes spécifiques. Comme mentionné précédemment, des recherches approfondies seront nécessaires à l’avenir pour établir l’utilisation clinique putative des cellules souches AFS chez l’homme. Les résultats prometteurs obtenus au cours des dernières années dans ce domaine scientifique encore jeune justifient clairement des investigations plus approfondies dans la direction de l’application clinique putative des cellules AFS. Dans cet article, nous souhaitons insister sur le fait que la mise en banque de cellules AFS présentant des mutations naturelles pour la recherche génétique humaine devrait commencer dès que possible dans différents laboratoires, selon des normes de qualité comparables. Il serait utile d’encourager les différents laboratoires à prélever du liquide amniotique lors d’amniocentèses avec des indications comparables, à des semaines de grossesse similaires. Les protocoles permettant d’isoler les cellules souches, de réaliser des dilutions minimales et de caractériser les lignées cellulaires AFS monoclonales ainsi obtenues devraient être standardisés. La mise en banque biologique de lignées cellulaires AFS avec des mutations caractérisées permettrait de sauter à l’étape suivante de la recherche génétique humaine utilisant des cellules souches humaines .